【摘 要】
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目的：探讨蛋白C（PC）p.Ala333Thr突变导致遗传性蛋白C缺陷症（IPCD）的分子机制。方法：使用氨基酸多序列比对工具T-Coffee评估突变氨基酸位点的保守性，使用突变有害性评分工具PolyPhen-2预测突变对PC结构和功能的危害性。利用定点突变试剂盒QuickMutationTM构建PC基因（PROC）野生型和p.Ala333Thr突变型质粒，并瞬时转染入HEK-293T细胞进行体外
【机 构】
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温州医科大学附属第一医院医学检验中心浙江省检验诊断及转化研究重点实验室
【基金项目】
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温州市基础性科研项目（Y20190088）； 浙江省医药卫生科技计划项目（2022KY205）； 浙江省中医药科技计划项目（2021ZB181）； 浙江省自然科学基金项目（LY22H200004）；
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目的：探讨蛋白C（PC）p.Ala333Thr突变导致遗传性蛋白C缺陷症（IPCD）的分子机制。方法：使用氨基酸多序列比对工具T-Coffee评估突变氨基酸位点的保守性，使用突变有害性评分工具PolyPhen-2预测突变对PC结构和功能的危害性。利用定点突变试剂盒QuickMutationTM构建PC基因（PROC）野生型和p.Ala333Thr突变型质粒，并瞬时转染入HEK-293T细胞进行体外表达，RT-qPCR检测突变PC转录24 h后的m RNA水平变化，利用蛋白印迹法（Western blot）和ELISA分别检测突变PC胞内外水平变化，并对细胞内质网、高尔基体PC进行免疫荧光染色，初步探讨p.Ala333Thr突变导致IPCD的分子机制。结果：多序列比对结果显示PC的Ala333位点保守性不高，PolyPhen-2对PROC的p.Ala333Thr突变评分为0.763。成功转染野生型与p.Ala333Thr突变型PROC质粒后，突变型PROC转录水平无明显变化；Western blot结果显示，突变型PROC的PC表达量明显下降；免疫荧光染色结果显示，野生型PC在内质网和高尔基体均有大量分布，而p.Ala333Thr突变型PC主要分布于内质网。结论：PROC p.Ala333Thr突变可能导致了PC的错误折叠和加工障碍，造成胞外PC表达量下降，最终引起了IPCD的发生。
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