观察雌二醇(E2)对增殖期ATDC5细胞的生长及C型利钠肽(CNP)信号通路蛋白[包括CNP、利钠肽B受体(NPR–B)及利钠肽C受体(NPR–C)]表达的影响。
方法以胰岛素(10 μg/ml)诱导分化第6天的ATDC5细胞为研究对象，观察E2对细胞生长的影响(MTT法)及CNP、NPR–B及NPR–C蛋白表达的影响(Western–blot法)：(1)量效研究：分别加入7个不同浓度(10–11～10–5 mol/L)的E2(浓度组)及DMSO溶剂(对照组)共8组，比较作用24 h后各组细胞数吸光度(A)值及作用48 h后各组细胞的蛋白水平；(2)时效研究：加E2(10–8 mol/L)作用不同时间(0、24、48、72、96、120 h)(6组)，除0 h外，各时间点均设相应溶剂对照组。比较不同时间点细胞数与其对照组的差值；比较0～96 h细胞蛋白水平；(3)雌激素受体阻断试验：分别加入E2(10–8 mol/L)(E2组)、雌激素受体阻断剂ICI 182782(10–7 mol/L)(ICI组)、E2(10–8 mol/L)和ICI 182780(10–7 mol/L) (E2＋ICI组)以及溶剂DMSO(对照组)，比较作用24 h后4组细胞数。
结果(1)量效研究：①作用24 h后，与对照组(0.38±0.02)相比，随E2浓度增大，ATDC5细胞数呈增加趋势，至浓度为10–9和10–8 mol/L时最为显著(A值分别为0.56±0.06和0.52±0.02，P值分别<0.05和<0.01)；②作用48 h后，与对照组相比，各浓度组细胞CNP、NPR–B及NPR–C蛋白水平均显著增加(P均<0.01)，CNP和NPR–B蛋白增加以10–10 mol/L组最为显著，NPR–C蛋白增加以10–9 mol/L组最为显著。(2)时效研究：①E2(10–8 mol/L)分别作用24～96 h后，各时间点细胞数均较对照组增多，48 h时最为显著(0.030±0.003)，随后逐渐减少(P<0.05或P<0.01)，至120 h时(0.007±0.001)与对照组差异无统计学意义。②CNP水平在24 h时显著增加(P<0.05)，48 h和72 h时有增加趋势，96 h时则有降低趋势。NPR–B和NPR–C蛋白水平在24 h时均有增加趋势(P分别为0.060和0.055)，48 h则均有降低的趋势，至72 h和96 h时均低于对照组(P均<0.05)。(3)雌激素受体阻断试验：作用24 h时，E2组、ICI组、(E2＋ICI)组和对照组4组细胞数的差异有统计学意义(P<0.05)。E2组(0.470±0.032)和(E2＋ICI)组(0.410±0.018)均多于对照组(0.370±0.011)，E2组多于(E2＋ICI)组(P均<0.05)；ICI组(0.360±0.035)与对照组差异无统计学意义。
结论E2能通过雌激素受体介导、以时效和量效作用方式促进增殖期ATDC5细胞生长。E2在一定浓度、不同作用时间时可以不同方式调节(上调或下调)CNP、NPR–B和NPR–C蛋白的表达，提示雌激素是CNP信号通路的调节因子之一。