【摘 要】
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目的对抗程序性死亡受体-1(programmed death-1,PD-1)单克隆抗体的电荷异质体进行结构鉴别及生物学功能分析。方法通过检测抗PD-1单克隆抗体经专一性蛋白酶(唾液酸酶及羧肽酶
【机 构】
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嘉和生物药业有限公司分析与制剂科学部,复旦大学生命科学学院,
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目的对抗程序性死亡受体-1(programmed death-1,PD-1)单克隆抗体的电荷异质体进行结构鉴别及生物学功能分析。方法通过检测抗PD-1单克隆抗体经专一性蛋白酶(唾液酸酶及羧肽酶)酶切前后的变化,初步确认电荷异质体的种类。采用阳离子交换色谱对电荷异质体进行分离和收集,经联用液相色谱-质谱(LC-MS)法分析电荷异质体各组分的组成;通过抑制抗原与配体相互作用影响NFAT荧光素酶报告基因表达的方法确定电荷异质体的生物学功能。结果碱性异质体含量较少,主要变化为重链N-末端谷氨酰胺未环化;酸性异质体主要变化为重链N383脱氨化和糖链末端唾液酸化。各异质体的生物学活性为89%~102%。结论抗PD-1单克隆抗体电荷异质体大部分修饰位点均远离互补决定区(complementary determining region,CDR),且在体外生物学活性方面差异较小。
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