宫颈癌SiHa/DDP细胞系EMT相关分子表达研究

来源 :中华肿瘤防治杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liwulai11111
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目的上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞丢失其上皮细胞特性获得间质细胞特征的过程,与多种抗肿瘤药物耐药相关。本研究通过构建宫颈癌顺铂耐药细胞系SiHa/DDP,检测其与亲本细胞之间EMT相关分子的表达差异,建立EMT与宫颈癌顺铂化疗敏感性和相关性模型,为宫颈癌化疗耐药研究提供基础。方法梯度药物浓度持续诱导建立SiHa耐药细胞系SiHa/DDP,四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测耐药指数,划痕实验及Transwell实验检测体外迁移及侵袭能力,Real-Time PCR及蛋白质印迹法检测EMT相关基因表达。结果建立耐药细胞系SiHa/DDP(RI=4.48),该细胞侵袭及迁移能力愈合百分比为(64.89±3.91)%,较亲本细胞(17.11±4.49)%增强,t=-12.738,P=0.001;穿膜细胞计数为281.33±27.74,较新本细胞150.33±22.3增强,t=-6.375,P=0.003。mRNA水平上SiHa/DDP细胞E-cadherin,Nano及Oct4表达较SiHa细胞降低,而Snail,Vimentin及N-cadherin表达较SiHa细胞增高,蛋白水平上在顺铂(DDP)浓度0.4μg/mL条件下稳定生长的SiHa细胞株,E-cadherin下调,Snail上调。当DDP浓度稳定至2.0μg/mL时,检测仍可见E-cadherin下调,但Snail蛋白表达消失,而GSK-3β表达明显增高。结论耐药细胞系SiHa/DDP呈现EMT表型,SiHa细胞获得顺铂耐药性与EMT相关,SiHa/DDP细胞Snail蛋白表达降低与顺铂上调GSK-3β诱发Snail向胞质转位导致快速降解相关。EMT是另一种耐药相关机制,可能成为逆转宫颈癌耐药治疗的新靶点。
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