【摘 要】
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目的:观察乌苯美司对大肠癌细胞增殖与凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法:分别用低、中、高浓度乌苯美司(1.0、4.0和8.0μmol/L)处理大肠癌细胞,应用CCK-8检测处理前后
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院中西结合肿瘤科,华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院消化内科,
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目的:观察乌苯美司对大肠癌细胞增殖与凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法:分别用低、中、高浓度乌苯美司(1.0、4.0和8.0μmol/L)处理大肠癌细胞,应用CCK-8检测处理前后细胞增殖情况;应用流式细胞仪检测处理前后大肠癌细胞生长周期及凋亡状态;应用MSP检测处理前后DAPK基因启动子甲基化状态,RT-PCR和蛋白质印迹法检测基因表达的改变。结果:正常大肠癌细胞表现为对数增殖状态,低浓度乌苯美司处理后的大肠癌细胞增殖率为61.23%,中浓度为20.25%,高浓度为7.97%,细胞增殖速度与乌苯美司浓度呈负相关;并且经乌苯美司处理后的大肠癌细胞传代5、10和15代的增殖速度均低于正常未处理细胞。对照组大肠癌细胞吸光度值为0.554 2±0.01,低浓度组为0.359 4±0.217,中浓度组为0.153 4±0.013,高浓度组为0.091 8±0.004,吸光度值组间差异有统计学意义,P<0.001;各组与对照组相比差异亦有统计学意义,P<0.001。而细胞凋亡率依次增高,正常组大肠癌细胞凋亡率为1.53%,低浓度组为24.33%,中浓度组为35.74%,高浓度组为46.27%,差异有统计学意义,F=9.18,P=0.025。正常大肠癌细胞DAPK基因启动子呈甲基化状态,mRNA和蛋白质表达缺失,经低、中、高浓度乌苯美司处理后,DAPK基因启动子被逆转成去甲基化状态,mRNA和蛋白质恢复表达,表达量与乌苯美司浓度正相关,处理的大肠癌细胞传代后仍可检测到DAPK基因mRNA表达。结论:乌苯美司可抑制大肠癌细胞增殖,并促进其凋亡,其作用机制可能与调整DAPK基因启动子甲基化状态有关。
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