【摘 要】
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目的 观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用.方法 将
【机 构】
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贵州医科大学病理学与病理生理学教研室,贵州贵阳550025;贵州省贵阳市第一人民医院肾内科,贵州贵阳550002;贵州医科大学病理学与病理生理学教研室,贵州贵阳550025;贵州省常见慢性疾病发病机制
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目的 观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用.方法 将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组.RTEC分别转染DNMT3B短发夹RNA(sh-DNMT3B)及DNMT3B过表达(DNMT3 B-OE)质粒后,反转录PCR检测RTEC的DNMT3B、SFRP1、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)、纤连蛋白(FN)mRNA表达,Western blot法检测DNMT3B、SFRP1、糖原合成酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin、Col4、FN的蛋白表达.免疫荧光细胞化学染色检测DNMT3B和SFRP1在RTEC的表达和定位.结果 与NG组相比,HG组RTEC中DNMT3B、β-catenin、p-GSK3β、Col4、FN蛋白表达增加,SFRP1表达降低.与空载体组比较,敲低DNMT3B后,HG条件下RTEC的SFRP1 mRNA及蛋白表达均增加,β-catenin、p-GSK3β、Col4蛋白表达降低,FN的mRNA和蛋白表达均降低,而β-catenin mRNA表达无明显改变;过表达DNMT3B后,各指标表达情况与上述结果相反.DNMT3B及SFRP1在RTEC的细胞核及细胞质中均有表达,与NG组相比,HG组的细胞可见DNMT3B在细胞核内聚集,且与SFRP1的共定位增加.结论 HG刺激增加RTEC的DNMT3B表达,下调SFRP1表达,激活Wnt/β-catenin信号通路促进细胞外基质形成.
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