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摘要介绍了松材线虫病的致病机理，并总结了其检疫方法及最新检测技术，以期为松材线虫病的检疫及防治提供参考。
关键词松材线虫；致病机理；检疫方法
中图分类号S763.37文献标识码B文章编号 1007-5739（2011）09-0177-01
松材线虫（Bursphelenchus xylophilus）病是世界上最具危险性的检疫性植物病害，被誉为松树的癌症。松材线虫为线虫门（Nematoda），侧尾腺纲（Secernentea），垫刃目（Tylen-chida），滑刃总科（Aphelenchoidoidea），寄生滑刃科（Parasita-phelenchidae），伞滑刃亚科（Bursaphelenchinae），伞滑刃属（Bursaphelenchus）[1]。该病害的传播方式一般是人为的，主要是在调运松类植物及其产品过程中传播的。其不断扩散蔓延的原因，主要是调运过程中的检测不到位，未能及时发现病害，错过了防治的有效期。每年我国由松材线虫病而造成的直接经济损失已达25亿元，间接的经济损失达250亿元[2]。
1松材线虫病的致病机理
松材线虫病的传播媒介是松褐天牛（Monochamus alter-natus），其通过松褐天牛携带病原体松材线虫而导致松树染病。因此，应根据松树、松材线虫、松褐天牛三者之间的相互关系制定适宜的防治对策。另外，细菌参与学说表明，松材线虫与细菌的共同参与也是诱使松树发病的必要条件。在此，认为松材线虫只是作为细菌的运输载体，而细菌才是真正的病原体。同时还有另一种看法，坚持病害的诱因是松材线虫和细菌共同作用的。虽然根据目前的最新研究，细菌参与学说可以对松树、松材线虫、松褐天牛三者之间的关系进行深刻地评价。但是，目前细菌参与学说还只是一种假说，还必须通过更多的试验来了解松材线虫病的本质，进一步揭示其致病机理[3]。
2松材线虫病的检疫方法
作为松材线虫为害的最早检测方法，流胶法在病害发生区或疫区诊断病树方面发挥了较大的作用，但该方法的准确性存在缺陷，因为很多因素都可以影响松树流脂。松材线虫的形态学鉴定方法虽然在我国口岸检疫中应用较多，但该方法依然存在问题，常出现错检和漏检现象，主要是因为松材线虫与拟松材线虫形态非常相像，形态学鉴定很难区分，尤其使得幼虫鉴定准确性更低。为了更加准确、快速地检测这一病害，pH值检测法、纤维素酶扩散检测法均被学者尝试过，但这些方法的应用效果都不是很理想，在松材线虫生长发育期、虫口数量、实验条件稳定性等方面都受到一定的制约，实用性表现不好。
近些年，分子生物学和生物技术发展势头迅猛，为松材线虫的检测提供了一条新途径，弥补了以上方法的缺陷。研究人员开始应用分子生物学的方法来检测松材线虫，如PCR-RAPD、PCR-RFLP和PCR-SSCP技术等。虽然这些方法具有较高的准确性，但其在技术和实验条件方面要求较高，使其不可能在基层松材线虫病监测和监管工作中推广使用；同时，上述方法检测时间较长，都需要把病木样本中的线虫先分离出来再检测，这样就降低了口岸木材与木质包装的检疫通关效率。因此，缺少简单、快速、准确的检测方法依然是制约该病防治工作的首要因素，是目前在生产中亟需解决的问题[4]。
3松材线虫病的最新检测技术
3.1线虫的培养技术
在进行检疫时，有很大一部分松材线虫是处于卵的状态，在普通显微镜下很难分辨，进而导致松材线虫进入境内，因此需要对可疑的木材进行真菌培养，以提高口岸检疫的成功率。经试验，同等条件下松材线虫在灰葡萄孢菌中的繁殖效果最好。把疑似含有松材线虫的木材做成长和宽均为5 cm的样本，用纱布包裹起来，置于直径为10 cm的烧杯中，然后置于25～28 ℃的培养箱内，并定期浇水保持湿润。每天收集烧杯底部积水并观察有无松材线虫成虫。
3.2线虫的分离技术
新型的线虫分离器的产生，满足了提高线虫的分离效率的要求，其结合了贝尔曼漏斗和浅盘法二者的优势，具有方便、快捷、经济及高效等特点。该分离器分离出100 g病木中超过70%的病原线虫所需时间较短，24 h内即可完成，其获得较纯净的线虫分离液主要是在乳胶管末端进行收集。该分离器的使用较浅盘法分离线虫省工节本，其分离过程不需要使用400目线虫网筛，而且过筛时的线虫很少丢失，使分离率进一步提高；该分离器的使用较贝尔曼漏斗法分离线虫更加高效，通过其分离器上直径18 cm/10目的网筛可以实现一次性分离很多样品，而且可以逸出大量的线虫，分离效率非常高。该分离器的构成为一体化设计，因此在冬季使用时，可以轻松进出保温保湿培养箱[5]。
3.3线虫的形态鉴定方法
松材线虫个体小（成虫体长<1 mm），肉眼难以看到。在显微镜下可以观察到松材线虫的雌虫和雄虫的形态特征。雌虫的形态特征如下：虫体细长，头部高，缢缩显著；口针基部稍微膨大；排泄孔位于食道和肠交界处，偶尔位于神经环处，半月体位于中食道球后约1个体宽处。阴门位置较后，阴门前唇向后延伸形成阴门盖，多数个体有明显的尾尖突，长约0.5～2.9 μm，平均长度为1.7 μm。雄虫的形态特征如下：虫体后部向腹部弯曲，虫体呈“J”形；体前部与雌虫相似；交合刺大，显著弯成弓状，基顶钝圆，基喙显著，锐尖，远端有盘状突；尾弯成弓状，尾端尖，有1个小的端生交合伞[6]。根据以上方法可以在口岸形成松材线虫培养、分离和鉴定的快速方法，既缩短了松材线虫检疫的时间，又可以提高口岸松材线虫的检出率，更好地为国门把关，确保农业生产和生态环境的安全。
4参考文献
[1] GU L，ZHANG J C.Bursaphelenchus singaporensis sp.n.（Nematoda：Para-sitaphelenchidae） in packagingwood from Singapore-a new species of the B[J]. xylophilus group.Zootaxa，2005（988）：1-12.
[2] 范军祥，黄焕华，钱明惠，等.松材线虫病的诊断方法探讨[J].广东林业科技，2008，24（5）：52-55.
[3] 姚圣忠.松材线虫病的细菌参与学说[J].河北林业科技，2008（6）：77-79.
[4] 王明旭，张志飞，罗宽何，等.松材线虫快速检测技术方法的比较研究[J].湖南农业大学学报，2004，30（3）：239-242.
[5] 崔建臣，张建华，张桂娟.改进型线虫分离器分离线虫及计数方法比较[J].植物检疫，2004，18（5）：275-276.
[6] 郑炜，顾建峰，吴昊，等.宁波马尾松中松材线虫形态变异研究[J].浙江林业科技，2007，27（3）：38-41.
关键词松材线虫；致病机理；检疫方法
中图分类号S763.37文献标识码B文章编号 1007-5739（2011）09-0177-01
松材线虫（Bursphelenchus xylophilus）病是世界上最具危险性的检疫性植物病害，被誉为松树的癌症。松材线虫为线虫门（Nematoda），侧尾腺纲（Secernentea），垫刃目（Tylen-chida），滑刃总科（Aphelenchoidoidea），寄生滑刃科（Parasita-phelenchidae），伞滑刃亚科（Bursaphelenchinae），伞滑刃属（Bursaphelenchus）[1]。该病害的传播方式一般是人为的，主要是在调运松类植物及其产品过程中传播的。其不断扩散蔓延的原因，主要是调运过程中的检测不到位，未能及时发现病害，错过了防治的有效期。每年我国由松材线虫病而造成的直接经济损失已达25亿元，间接的经济损失达250亿元[2]。
1松材线虫病的致病机理
松材线虫病的传播媒介是松褐天牛（Monochamus alter-natus），其通过松褐天牛携带病原体松材线虫而导致松树染病。因此，应根据松树、松材线虫、松褐天牛三者之间的相互关系制定适宜的防治对策。另外，细菌参与学说表明，松材线虫与细菌的共同参与也是诱使松树发病的必要条件。在此，认为松材线虫只是作为细菌的运输载体，而细菌才是真正的病原体。同时还有另一种看法，坚持病害的诱因是松材线虫和细菌共同作用的。虽然根据目前的最新研究，细菌参与学说可以对松树、松材线虫、松褐天牛三者之间的关系进行深刻地评价。但是，目前细菌参与学说还只是一种假说，还必须通过更多的试验来了解松材线虫病的本质，进一步揭示其致病机理[3]。
2松材线虫病的检疫方法
作为松材线虫为害的最早检测方法，流胶法在病害发生区或疫区诊断病树方面发挥了较大的作用，但该方法的准确性存在缺陷，因为很多因素都可以影响松树流脂。松材线虫的形态学鉴定方法虽然在我国口岸检疫中应用较多，但该方法依然存在问题，常出现错检和漏检现象，主要是因为松材线虫与拟松材线虫形态非常相像，形态学鉴定很难区分，尤其使得幼虫鉴定准确性更低。为了更加准确、快速地检测这一病害，pH值检测法、纤维素酶扩散检测法均被学者尝试过，但这些方法的应用效果都不是很理想，在松材线虫生长发育期、虫口数量、实验条件稳定性等方面都受到一定的制约，实用性表现不好。
近些年，分子生物学和生物技术发展势头迅猛，为松材线虫的检测提供了一条新途径，弥补了以上方法的缺陷。研究人员开始应用分子生物学的方法来检测松材线虫，如PCR-RAPD、PCR-RFLP和PCR-SSCP技术等。虽然这些方法具有较高的准确性，但其在技术和实验条件方面要求较高，使其不可能在基层松材线虫病监测和监管工作中推广使用；同时，上述方法检测时间较长，都需要把病木样本中的线虫先分离出来再检测，这样就降低了口岸木材与木质包装的检疫通关效率。因此，缺少简单、快速、准确的检测方法依然是制约该病防治工作的首要因素，是目前在生产中亟需解决的问题[4]。
3松材线虫病的最新检测技术
3.1线虫的培养技术
在进行检疫时，有很大一部分松材线虫是处于卵的状态，在普通显微镜下很难分辨，进而导致松材线虫进入境内，因此需要对可疑的木材进行真菌培养，以提高口岸检疫的成功率。经试验，同等条件下松材线虫在灰葡萄孢菌中的繁殖效果最好。把疑似含有松材线虫的木材做成长和宽均为5 cm的样本，用纱布包裹起来，置于直径为10 cm的烧杯中，然后置于25～28 ℃的培养箱内，并定期浇水保持湿润。每天收集烧杯底部积水并观察有无松材线虫成虫。
3.2线虫的分离技术
新型的线虫分离器的产生，满足了提高线虫的分离效率的要求，其结合了贝尔曼漏斗和浅盘法二者的优势，具有方便、快捷、经济及高效等特点。该分离器分离出100 g病木中超过70%的病原线虫所需时间较短，24 h内即可完成，其获得较纯净的线虫分离液主要是在乳胶管末端进行收集。该分离器的使用较浅盘法分离线虫省工节本，其分离过程不需要使用400目线虫网筛，而且过筛时的线虫很少丢失，使分离率进一步提高；该分离器的使用较贝尔曼漏斗法分离线虫更加高效，通过其分离器上直径18 cm/10目的网筛可以实现一次性分离很多样品，而且可以逸出大量的线虫，分离效率非常高。该分离器的构成为一体化设计，因此在冬季使用时，可以轻松进出保温保湿培养箱[5]。
3.3线虫的形态鉴定方法
松材线虫个体小（成虫体长<1 mm），肉眼难以看到。在显微镜下可以观察到松材线虫的雌虫和雄虫的形态特征。雌虫的形态特征如下：虫体细长，头部高，缢缩显著；口针基部稍微膨大；排泄孔位于食道和肠交界处，偶尔位于神经环处，半月体位于中食道球后约1个体宽处。阴门位置较后，阴门前唇向后延伸形成阴门盖，多数个体有明显的尾尖突，长约0.5～2.9 μm，平均长度为1.7 μm。雄虫的形态特征如下：虫体后部向腹部弯曲，虫体呈“J”形；体前部与雌虫相似；交合刺大，显著弯成弓状，基顶钝圆，基喙显著，锐尖，远端有盘状突；尾弯成弓状，尾端尖，有1个小的端生交合伞[6]。根据以上方法可以在口岸形成松材线虫培养、分离和鉴定的快速方法，既缩短了松材线虫检疫的时间，又可以提高口岸松材线虫的检出率，更好地为国门把关，确保农业生产和生态环境的安全。
4参考文献
[1] GU L，ZHANG J C.Bursaphelenchus singaporensis sp.n.（Nematoda：Para-sitaphelenchidae） in packagingwood from Singapore-a new species of the B[J]. xylophilus group.Zootaxa，2005（988）：1-12.
[2] 范军祥，黄焕华，钱明惠，等.松材线虫病的诊断方法探讨[J].广东林业科技，2008，24（5）：52-55.
[3] 姚圣忠.松材线虫病的细菌参与学说[J].河北林业科技，2008（6）：77-79.
[4] 王明旭，张志飞，罗宽何，等.松材线虫快速检测技术方法的比较研究[J].湖南农业大学学报，2004，30（3）：239-242.
[5] 崔建臣，张建华，张桂娟.改进型线虫分离器分离线虫及计数方法比较[J].植物检疫，2004，18（5）：275-276.
[6] 郑炜，顾建峰，吴昊，等.宁波马尾松中松材线虫形态变异研究[J].浙江林业科技，2007，27（3）：38-41.