基于miRNA-30的RNAi表达框架的构建及其有效性验证

来源 :临床检验杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：danielliang

【摘要】

：

目的构建基于人源性miRNA-30,针对EGFP基因的RNAi表达框架并验证其有效性。方法融合PCR构建RNAi表达框架,经凝胶电泳、测序比对及二级结构预测后,将该表达框架与p EGFP-N2质

【作者】

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李亚红赵丹丹李思佳覃淇邱彤彤彭剑雄

【机构】

：

中南大学湘雅医学院医学检验系

【出处】

：

临床检验杂志

【发表日期】

：

2016年8期

【关键词】

：

RNAi 人工miRNA表达框架 A549细胞 HCT116细胞 HEK-293细胞

【基金项目】

：

中南大学研究生科研创新项目(2016zzts500);中南大学本科生自由探索项目(201610533579)

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目的构建基于人源性miRNA-30,针对EGFP基因的RNAi表达框架并验证其有效性。方法融合PCR构建RNAi表达框架,经凝胶电泳、测序比对及二级结构预测后,将该表达框架与p EGFP-N2质粒共转染A549、HCT116及HEK-293细胞,48 h后倒置荧光显微镜观察EGFP的表达情况并用流式细胞仪检测平均荧光强度。结果凝胶电泳和测序比对均显示RNAi表达框架与设计的相符,二级结构预测显示,新型RNAi表达框架与人源性miRNA-30的二级结构高度相似;共转染该表达框架与p EGFP-N2质粒48

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