【摘 要】
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运用理性设计的方法,提高了来源于土曲霉Aspergillus terreus的酸性脂肪酶ATL的催化活力。通过同源比对,选择脂肪酶盖子区域和底物结合口袋域中的位点进行定点突变,得到8种AT
【机 构】
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江南大学工业生物技术教育部重点实验室生物工程学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.31671799);江苏省“六大人才高峰”项目(No.NY-010);江苏省“333工程”项目(No.BRA2015316);国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2012AA022207)资助
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运用理性设计的方法,提高了来源于土曲霉Aspergillus terreus的酸性脂肪酶ATL的催化活力。通过同源比对,选择脂肪酶盖子区域和底物结合口袋域中的位点进行定点突变,得到8种ATL的突变脂肪酶。结果发现,盖子区域突变酶ATLLid与底物结合口袋域突变酶ATLV218W的催化活性显著提高。ATLLid和ATLV218W对底物对硝基苯酚月桂酸酯p-nitrophenyl laurate（p-NPL）的催化活性最高,kcat值较ATL分别提高了39.37倍和50.79倍,kcat/Km值较ATL分别提高了2.85倍和8.48倍。与ATL相比,ATLLid和ATLV218W的热稳定性略有下降,最适pH为5.0,pH 4.0–8.0具有较好的稳定性,说明突变未对ATL的嗜酸耐酸特性产生影响。通过同源建模模拟及分子对接技术分析底物p-NPL与酶分子间的相互作用,解析了ATLLid和ATLV218W催化活性提高的机理。
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