【摘 要】
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目的 建立呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)间接竞争酶联免疫检测法.方法通过衍生化反应制备了人工抗原CPAM
【机 构】
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山西大学生命科学学院, 太原 030006山西大学食品药品快速检测中心, 太原 030006;山西大学食品药品快速检测中心, 太原 030006;山西省食品药品监督管理局, 太原 030006;
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目的 建立呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)间接竞争酶联免疫检测法.方法通过衍生化反应制备了人工抗原CPAMOZ并用活化酯法将其与鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)连接成为包被原CPAMOZ-OVA.对包被原和单克隆抗体的最佳工作浓度、封闭液浓度、竞争时间、辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗(horseradish peroxidase labelled goat antimouse IgG conjugate,HRP-IgG)、孵育时间和显色反应时间进行优化,并对方法灵敏度、特异性、精密度和准确度进行方法学评价.结果最优条件下,包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为500倍和2000倍,封闭液浓度为2%,竞争时间为30 min,二抗孵育时间为30 min,显色时间为15 min.所建立标准曲线的对应线性方程是Y=-0.439X+0.670(r2=0.992),IC50为2.439 ng/mL,线性范围为0.506~11.765 ng/mL,回收率为86.7%~90.1%,批内和批间变异系数分别为1.4%~5.8%和2.1%~4.9%.结论该方法特异性强,准确性、精密度和重现性良好,可用于对AMOZ的快速筛查.
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