【摘 要】
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目的 构建表达EGFRvⅢ的树突状细胞（dendritic cells, DC）,并使其诱导细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）成熟，检测该细胞对胃癌细胞及EGFRvⅢ+胃癌细胞的杀伤作用。方法 制备携带EGFRvⅢ的慢病毒，并用荧光定量法测定慢病毒滴度。分别使用携带EGFRvⅢ的慢病毒、空白对照的慢病毒转染DC,Western blotting测定EGFR
【基金项目】
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河南省科技攻关计划（162102310513）；
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目的 构建表达EGFRvⅢ的树突状细胞（dendritic cells, DC）,并使其诱导细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）成熟，检测该细胞对胃癌细胞及EGFRvⅢ+胃癌细胞的杀伤作用。方法 制备携带EGFRvⅢ的慢病毒，并用荧光定量法测定慢病毒滴度。分别使用携带EGFRvⅢ的慢病毒、空白对照的慢病毒转染DC,Western blotting测定EGFRvⅢ的表达。自身CTL分别与EGFRvⅢ+DC、空白慢病毒感染的DC、成熟DC共培养，采用ELISA法检测上清液中IL-10和IFN-γ水平。按不同比例（1∶5、1∶10、1∶20、1∶40）将传代后的SGC7901细胞和SGC7901-EGFRvⅢ+细胞分别加入不同组的CTL培养24 h, MTT法测定CTL对胃癌细胞的杀伤作用。以上所有实验均重复3次。结果 慢病毒感染DC的感染率可达58%。EGFRvⅢ将慢病毒作为载体可使DC感染并成功表达EGFRvⅢ。在体外应用EGFRvⅢ+DC诱导CTL成熟，可使CTL产生更多IL-10、INF-γ,且呈剂量依赖性（P＜0.01）,其对胃癌细胞的杀伤作用更强（P＜0.05）,而且对高表达EGFRvⅢ的胃癌细胞的杀伤作用最强。结论 相同条件下，由EGFRvⅢ+DC诱导成熟的CTL对EGFRvⅢ+胃癌7901细胞在体外的免疫杀伤作用明显增强。
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