【摘 要】
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查尔酮合酶(chalconesynthase,CHS)是类黄酮生物合成过程中的第一个关键酶,也是限速酶,它直接影响并限制类黄酮的合成与积累。在克隆得到日本蛇根草CHS基因(Oj CHS)基础上,将
【机 构】
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贵州师范大学生命科学学院植物生理发育调控重点实验; 贵阳中医学院药学院; 西南喀斯特山地生物多样性保护重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31760076);贵州省教育厅青年科技人才成长项目(黔教合KY字[2017]122);贵州省联合基金项目(黔科合LH字[2016] 7211号,黔科合LH字[2017] 7358号);贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术研究课题(S20160829000);贵州省重点实验室建设项目(黔科合计Z字[2011]4005)共同资助
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查尔酮合酶(chalconesynthase,CHS)是类黄酮生物合成过程中的第一个关键酶,也是限速酶,它直接影响并限制类黄酮的合成与积累。在克隆得到日本蛇根草CHS基因(Oj CHS)基础上,将该基因插入原核表达载体pET-28a,完成重组表达质粒pET28a-CHS的构建。随后,利用冻融法将上述质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞中用于重组蛋白的表达。选择不同IPTG浓度、诱导温度及诱导时间对重组菌进行诱导,确定了可溶性重组蛋白的最佳诱导表达条件。最后,通过洗脱、纯化、透析与浓缩完成重组蛋白的纯化。结果显示,成功构建原核表达载体pET28a-CHS,可溶性重组蛋白最佳诱导条件为:IPTG浓度0.45 mmol·L-1,25℃下诱导12 h。最后大量制备并纯化获得符合预期大小的可溶性蛋白,为深入研究Oj CHS的生物学功能奠定了基础。
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