微量血清中25-羟维生素D的柱前衍生-高效液相色谱-串联质谱法的建立及其临床应用

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目的建立微量血清中25-羟维生素D2(25-(OH)D2)和25-羟维生素D3(25-(OH)D3)的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),并用于临床常规检验。方法 10微升血清样本中加入同位素内标,用无水乙醇沉淀蛋白再用正己烷萃取,氮气吹干后衍生,复溶后经液相色谱分离、质谱定性定量。结果 25-(OH)D2和25-(OH)D3的线性相关系数(r)分别为0.9958和0.9937;批内精密度小于13.2%,批间精密度小于11.9%,平均加样回收率均在93.6%~109.7%之间;25-(OH)D2和25-(OH)D3的LOD分别为0.1 ng/ml和0.025 ng/ml,LOQ分别为1.5 ng/ml和5 ng/ml。在所检测的213份血样中约有6%的儿童的25-羟维生素D低于15 ng/ml。结论本法满足方法学要求,可用于微量血清中25-羟维生素D2和25-羟维生素D3的测定,对儿科临床诊断治疗有重要提示意义。
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