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目的：建立稳定高效的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养体系，用于分离克隆胚胎干细胞（Embryonic stem cell，ES细胞）。方法：取妊娠13．5—14．5d的胎鼠，采用组织消化法结合组织块培养法分离、培养小鼠成纤维细胞；MTT法测定细胞生长曲线，结合倒置显微镜观察筛选小鼠成纤维细胞饲养层的最佳种植密度；MTT法筛选丝裂霉素C作用的最佳浓度和时间。取妊娠3．5d的小鼠囊胚在经丝裂霉素c处理的饲养层上培养，观察胚胎干细胞生长情况。结果：组织消化法结合组织块培养法是分离培养小鼠成纤维细胞的较好的方法；1&