论文部分内容阅读
摘 要：分别采用A、B、C三个公司的商品化酶联免疫吸附试验（ELISA）抗体检测试剂盒和血凝抑制（HI）试验方法对168份临床免疫鸡血清和标准阴阳性血清进行新城疫抗体监测方法的比对试验与研究，比较间接ELISA和血凝抑制（HI）两种试验方法的相关性。研究结果表明，A、B、C三个公司生产的商品化间接ELISA抗体检测试剂盒的检测结果与血凝抑制（HI）试验的阳性符合率分别为98%、96.7%、90.2%；阴性符合率分别为86.7%、80%、86.7%；阴阳性总体符合率分别为97%、95.2%、89.9%；A、B、C三个公司的ELISA抗体检测试剂盒的检测时间分别为2.5、3、3h。产品价格分别为1100、800、700元。比较发现，间接ELISA方法是一种快速、敏感、特异的血清学诊断方法，不同公司生产的商品化ELISA抗体检测试剂盒在敏感性、特异性和检测时间上均存在较大的差异，综合分析，B公司生产的商品化酶联免疫吸附试验（ELISA）抗体检测试剂盒成本较低，敏感性较高，可以用于临床样本的大规模检测。
关键词：鸡新城疫；抗体；ELISA；HI
新城疫又称“伪鸡瘟”或“亚洲鸡瘟”，病毒高度依赖接触方式传染，主要影响鸡的呼吸系统、中枢神经系统、消化系统并表现黏膜出血的体征[1]。鸡新城疫病在我国的流行非常广泛，往往在季节交替时高发，给养殖户造成了巨大的经济损失[2]。新城疫病毒（NDV）的血清学检测方法主要有病毒中和试验（VN）、琼脂扩散试验（AGP）、血凝抑制试验（HI）和酶联免疫吸附试验（ELISA）等[3]。其中血凝抑制试验（HI）仍然是目前应用最广泛的血清学检测方法，但是由于ELISA具有快速、准确、简便的优点，加之ELISA具有可批量检测及自动化检测的优势，其更适合于大规模检测和便于标准化，用间接ELISA方法代替传统的血凝抑制（HI）方法来检测NDV抗体水平已成为一种趋势，ELISA技术已越来越被广大实验室所采用。
目前，ELISA方法与HI试验的比较研究已有多次报道，然而两种试验方法的相关性比较结果从不相关到显著相关存在很大的差异。与此同时，采用不同公司生产的商品化ELISA抗体检测试剂盒所得出的结果也是不尽相同。本试验中，我们选取了A、B、C三家公司的商品化ELISA新城疫抗体检测试剂盒对168份HI滴度不同的血清样本和ND的标准阳性血清、阴性血清进行NDV的抗体检测试验，分析不同公司生产的ELISA试剂盒检测结果与HI法检测鸡血清中NDV抗体结果的相关性，比较了A、B、C三家公司生产的ELISA试剂盒检测结果的阳性符合率、试剂盒价格以及试验时长等数据，以期选出适用于临床大规模鸡场新城疫抗体检测的ELISA试剂盒。
1 材料与方法
1.1 试剂材料 鸡新城疫血凝抗原、阴性血清、阳性血清，购自青岛易邦生物工程有限公司；鸡新城疫抗体测试剂盒分别购自A、B、C三家生物科技有限公司；待检的168份血清样品，来自山东省滨州市某大型肉种鸡养殖场的2个鸡舍，均从消毒过的鸡翅静脉采集，每份1～2ml，分离血清置4℃条件下备用。
1.2 方法
1.2.1 HI试验方法 采用微量血凝抑制试验，按照GB/16550-2008进行操作。使用1%的鸡红细胞和4个HA单位的病毒抗原进行常规操作。只有在阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2、阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差在一个稀释度范围内、并且阴、阳性血清都不发生自凝的情况下，HI的试验结果才能判定有效。检测结果以HI效价大于或等于23为阳性。
1.2.2 间接ELISA方法 其操作方法分别依照A、B、C三家公司的禽新城疫抗体ELISA检测试剂盒说明书进行。
1.3 间接ELISA方法和HI方法的检测符合率分析[4] 以HI为基础，HI检测结果为阳性的样本用ELISA方法得出的阳性率便为二者的阳性符合率，HI检测结果为阴性的样本用ELISA方法得出的阴性率便为二者的阴性符合率，用两种方法检测同为阳性或阴性的血清样本占检测总样本的比率为二者的总体符合率。
1.4 待检样品的检测 采用A、B、C三家公司的禽新城疫抗体ELISA检测试剂盒分别对168份HI滴度不同的样品（其中153份为阳性血清样品，15份为阴性血清样品）进行检测，利用统计学方法对检测结果进行相关性分析。
2 结果与分析
2.1 ELISA方法对HI血清样品的检测结果 按照新城疫抗体ELISA检测试剂盒提供的临界点判定值，采用A、B、C三家公司的禽新城疫抗体ELISA检测试剂盒分别对168份常规血清样品进行检测，结果见表1、表2、表3。
由表1、表2、表3可以看出，A公司生产的ELISA试剂盒与HI方法的阳性符合率达到了98%，阴性符合率为86.7%，阴阳性总体符合率为97%；B公司生产的ELISA试剂盒与HI方法的阳性符合率为96.7%，阴性符合率为80%，阴阳性总体符合率为95.2%；C公司生产的ELISA试剂盒与HI方法的阳性符合率为94.8%，阴性符合率为86.7%，阴阳性总体符合率为94%。
2.2 三家公司ELISA检测试剂盒的价格及试验时长 A、B、C三家公司的禽新城疫抗体ELISA检测试剂盒价格及试验时长见表4。
3 讨论
目前，已经有多种血清学方法用于NDV抗体的检测，其中ELISA和血凝抑制试验（HI）的应用最为广泛，两种方法简单易学，对养鸡场及养殖户来说，掌握一种适合自己的检测方法就可以节约鸡新城疫抗体检测的成本，并且能够实时监测鸡群的免疫状况，在临床上对鸡新城疫疾病的防控能够起到很好的预防效果。
结合本试验所得出的数据可以看出，A公司生产的鸡新城疫抗体ELISA检测试剂盒与HI方法的阳性符合率最高，达到了98%，阴阳性总体符合率达到了97%，产品性能在三家公司中最好，平均试验时长为2.5h，试验时间短，但是其试剂盒的价格为1100元，较其他两家公司生产的试剂盒的价格偏贵，不适于临床上大规模推广；其次是B公司生产的鸡新城疫抗体ELISA检测试剂盒，该试剂盒检测结果与HI方法的阳性符合率为96.7%，阴阳性总体符合率为95.2%，产品性能稍低于A公司产品，但其试剂盒价格为800元，价格优势明显；C公司生产的试剂盒检测结果与HI方法的阳性符合率仅为90.2%，阴阳性总体符合率为89.9%，虽然价格最低，但在产品性能上均与其他两家公司的产品存在差异。
与HI方法检测ND抗体灵敏度低、耗时长，且经验依赖性强相比，ELISA法检测ND抗体，其敏感性、特异性、检测时长等均优于HI检测方法，是一种快速、特异、敏感的血清学诊断方法，本试验中，通过比较A、B、C三家公司生产的鸡新城疫抗体ELISA检测试剂盒的性能、价格及试验时长等数据，B公司生产的ELISA检测试剂盒价格优势明显且产品性能完全能够满足临床需要，适于临床样本的大规模检测。
参考文献：
[1] 王敏，付祖权，刘晓丽，等.鸡新城疫病毒强毒株的分离鉴定及其生物学特性的研究[J].中国兽医科学， 2017（9）：1159-1166.
[2] 劉金玲，李晓静，李红杰，等.检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒双重RT-PCR的建立与初步应用[J].中国兽医学报，2016，36（10）：1701-1705.
[3] 雷莉辉，乔立东，关文怡，等.ELISA法与HI法检测鸡新城疫抗体的比较[J].山东畜牧兽医，2014（4）：9-9.
[4] 张国中，胡旭东，秦春芝，等.间接ELISA和HI方法检测鸡新城疫病毒抗体的相关性分析[J].中国家禽，2007，29（4）：14-16.□
关键词：鸡新城疫；抗体；ELISA；HI
新城疫又称“伪鸡瘟”或“亚洲鸡瘟”，病毒高度依赖接触方式传染，主要影响鸡的呼吸系统、中枢神经系统、消化系统并表现黏膜出血的体征[1]。鸡新城疫病在我国的流行非常广泛，往往在季节交替时高发，给养殖户造成了巨大的经济损失[2]。新城疫病毒（NDV）的血清学检测方法主要有病毒中和试验（VN）、琼脂扩散试验（AGP）、血凝抑制试验（HI）和酶联免疫吸附试验（ELISA）等[3]。其中血凝抑制试验（HI）仍然是目前应用最广泛的血清学检测方法，但是由于ELISA具有快速、准确、简便的优点，加之ELISA具有可批量检测及自动化检测的优势，其更适合于大规模检测和便于标准化，用间接ELISA方法代替传统的血凝抑制（HI）方法来检测NDV抗体水平已成为一种趋势，ELISA技术已越来越被广大实验室所采用。
目前，ELISA方法与HI试验的比较研究已有多次报道，然而两种试验方法的相关性比较结果从不相关到显著相关存在很大的差异。与此同时，采用不同公司生产的商品化ELISA抗体检测试剂盒所得出的结果也是不尽相同。本试验中，我们选取了A、B、C三家公司的商品化ELISA新城疫抗体检测试剂盒对168份HI滴度不同的血清样本和ND的标准阳性血清、阴性血清进行NDV的抗体检测试验，分析不同公司生产的ELISA试剂盒检测结果与HI法检测鸡血清中NDV抗体结果的相关性，比较了A、B、C三家公司生产的ELISA试剂盒检测结果的阳性符合率、试剂盒价格以及试验时长等数据，以期选出适用于临床大规模鸡场新城疫抗体检测的ELISA试剂盒。
1 材料与方法
1.1 试剂材料 鸡新城疫血凝抗原、阴性血清、阳性血清，购自青岛易邦生物工程有限公司；鸡新城疫抗体测试剂盒分别购自A、B、C三家生物科技有限公司；待检的168份血清样品，来自山东省滨州市某大型肉种鸡养殖场的2个鸡舍，均从消毒过的鸡翅静脉采集，每份1～2ml，分离血清置4℃条件下备用。
1.2 方法
1.2.1 HI试验方法 采用微量血凝抑制试验，按照GB/16550-2008进行操作。使用1%的鸡红细胞和4个HA单位的病毒抗原进行常规操作。只有在阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2、阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差在一个稀释度范围内、并且阴、阳性血清都不发生自凝的情况下，HI的试验结果才能判定有效。检测结果以HI效价大于或等于23为阳性。
1.2.2 间接ELISA方法 其操作方法分别依照A、B、C三家公司的禽新城疫抗体ELISA检测试剂盒说明书进行。
1.3 间接ELISA方法和HI方法的检测符合率分析[4] 以HI为基础，HI检测结果为阳性的样本用ELISA方法得出的阳性率便为二者的阳性符合率，HI检测结果为阴性的样本用ELISA方法得出的阴性率便为二者的阴性符合率，用两种方法检测同为阳性或阴性的血清样本占检测总样本的比率为二者的总体符合率。
1.4 待检样品的检测 采用A、B、C三家公司的禽新城疫抗体ELISA检测试剂盒分别对168份HI滴度不同的样品（其中153份为阳性血清样品，15份为阴性血清样品）进行检测，利用统计学方法对检测结果进行相关性分析。
2 结果与分析
2.1 ELISA方法对HI血清样品的检测结果 按照新城疫抗体ELISA检测试剂盒提供的临界点判定值，采用A、B、C三家公司的禽新城疫抗体ELISA检测试剂盒分别对168份常规血清样品进行检测，结果见表1、表2、表3。
由表1、表2、表3可以看出，A公司生产的ELISA试剂盒与HI方法的阳性符合率达到了98%，阴性符合率为86.7%，阴阳性总体符合率为97%；B公司生产的ELISA试剂盒与HI方法的阳性符合率为96.7%，阴性符合率为80%，阴阳性总体符合率为95.2%；C公司生产的ELISA试剂盒与HI方法的阳性符合率为94.8%，阴性符合率为86.7%，阴阳性总体符合率为94%。
2.2 三家公司ELISA检测试剂盒的价格及试验时长 A、B、C三家公司的禽新城疫抗体ELISA检测试剂盒价格及试验时长见表4。
3 讨论
目前，已经有多种血清学方法用于NDV抗体的检测，其中ELISA和血凝抑制试验（HI）的应用最为广泛，两种方法简单易学，对养鸡场及养殖户来说，掌握一种适合自己的检测方法就可以节约鸡新城疫抗体检测的成本，并且能够实时监测鸡群的免疫状况，在临床上对鸡新城疫疾病的防控能够起到很好的预防效果。
结合本试验所得出的数据可以看出，A公司生产的鸡新城疫抗体ELISA检测试剂盒与HI方法的阳性符合率最高，达到了98%，阴阳性总体符合率达到了97%，产品性能在三家公司中最好，平均试验时长为2.5h，试验时间短，但是其试剂盒的价格为1100元，较其他两家公司生产的试剂盒的价格偏贵，不适于临床上大规模推广；其次是B公司生产的鸡新城疫抗体ELISA检测试剂盒，该试剂盒检测结果与HI方法的阳性符合率为96.7%，阴阳性总体符合率为95.2%，产品性能稍低于A公司产品，但其试剂盒价格为800元，价格优势明显；C公司生产的试剂盒检测结果与HI方法的阳性符合率仅为90.2%，阴阳性总体符合率为89.9%，虽然价格最低，但在产品性能上均与其他两家公司的产品存在差异。
与HI方法检测ND抗体灵敏度低、耗时长，且经验依赖性强相比，ELISA法检测ND抗体，其敏感性、特异性、检测时长等均优于HI检测方法，是一种快速、特异、敏感的血清学诊断方法，本试验中，通过比较A、B、C三家公司生产的鸡新城疫抗体ELISA检测试剂盒的性能、价格及试验时长等数据，B公司生产的ELISA检测试剂盒价格优势明显且产品性能完全能够满足临床需要，适于临床样本的大规模检测。
参考文献：
[1] 王敏，付祖权，刘晓丽，等.鸡新城疫病毒强毒株的分离鉴定及其生物学特性的研究[J].中国兽医科学， 2017（9）：1159-1166.
[2] 劉金玲，李晓静，李红杰，等.检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒双重RT-PCR的建立与初步应用[J].中国兽医学报，2016，36（10）：1701-1705.
[3] 雷莉辉，乔立东，关文怡，等.ELISA法与HI法检测鸡新城疫抗体的比较[J].山东畜牧兽医，2014（4）：9-9.
[4] 张国中，胡旭东，秦春芝，等.间接ELISA和HI方法检测鸡新城疫病毒抗体的相关性分析[J].中国家禽，2007，29（4）：14-16.□