高亲和力抗Met人源基因工程抗体scFv的筛选与特性分析

来源 :中国肿瘤生物治疗杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanghongtao3446
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目的:应用噬菌体展示技术制备抗HGF受体Met特异性、高亲和力的全人抗体scFv片段。方法:以从天然抗体库中筛选出的Fab基因可变区VH和VL为模板,分别在CDR区引入有限突变和随机突变,扩增出scFv基因库,克隆于pComb3XSS中,构建scFv次级突变抗体库,筛选高亲和力克隆。结果:经5轮细胞筛选和2轮抗原固相筛选,选取60个克隆进行ELISA检测,选择较高亲和力的噬菌体抗体,克隆于原核表达载体pBAD—gⅢ/A中,经诱导表达、SDS—PAGE和Westernblotting分析,在相对分子质量30
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