【摘 要】
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目的 将人类Tudor-SN(tudor staphylococcal nuclease)蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达.方法
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目的 将人类Tudor-SN(tudor staphylococcal nuclease)蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的 基因,利用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切法将目的 片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2- Tudor-SN-SN (1~4)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的 蛋白的融合表达情况.结果 以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达.结论重组pEGFP-C2- hTudor-SN-SN (1~4)质粒成功构建并表达.
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