【摘 要】
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目的 研究衣霉素诱导HSC-T6大鼠肝星状细胞发生内质网应激(ERS)时对细胞增殖活化及细胞凋亡的影响及可能机制.方法 以葡萄糖调节蛋白(GRP78)表达水平为指标摸索衣霉素诱导HSC-T6细胞ERS适宜的浓度及时间,建立衣霉素诱导HSC-T6细胞发生ERS的细胞模型.在此条件下将HSC-T6细胞随机分为对照组、1 mL/L二甲基亚砜(DMSO)处理组、1 μg/mL衣霉素处理组,分别处理细胞12 h.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期的变化;Western blot法检测α
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院病理生理学教研室,贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室,贵州贵阳550000
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目的 研究衣霉素诱导HSC-T6大鼠肝星状细胞发生内质网应激(ERS)时对细胞增殖活化及细胞凋亡的影响及可能机制.方法 以葡萄糖调节蛋白(GRP78)表达水平为指标摸索衣霉素诱导HSC-T6细胞ERS适宜的浓度及时间,建立衣霉素诱导HSC-T6细胞发生ERS的细胞模型.在此条件下将HSC-T6细胞随机分为对照组、1 mL/L二甲基亚砜(DMSO)处理组、1 μg/mL衣霉素处理组,分别处理细胞12 h.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期的变化;Western blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CCAAT/增强子结合蛋白子同源蛋白(CHOP)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、细胞周期蛋白1 (cyclin D1)的蛋白表达.结果 筛选出衣霉素诱导HSC-T6细胞发生ERS的适宜剂量为1μg/mL,适宜时间为12 h.与对照组及DMSO处理组相比,1μμg/mL衣霉素处理组细胞增殖变化不明显,但α-SMA表达上调、细胞凋亡增加,G1期细胞比例明显增加、S期细胞比例下降,ERS诱导凋亡相关信号蛋白CHOP、caspase-12均显著上调,cyclin D1表达显著下调.结论 衣霉素处理HSC-T6细胞12 h可致细胞发生明显ERS并活化,活化过程中细胞数量变化不明显可能与GRP78/CHOP/caspase-12通路激活导致的细胞凋亡增多、细胞周期阻滞有关.
其他文献
[目的]以副溶血弧菌VP2918为研究对象,研究其对副溶血弧菌的生物学特性和致病性的影响.[方法]利用同源重组技术构建了vp2918基因的基因缺失株(△vp2918)和互补株(C△vp2918),并对野生株、缺失株和互补株的细菌生长曲线、运动性、生物被膜形成能力、对HeLa细胞的黏附能力、细胞毒性、对小鼠的致死率和组织载菌量进行分析.[结果]缺失vp2918基因不影响副溶血弧菌的生长特性、运动性、生物被膜形成能力以及对HeLa细胞的黏附能力.但与野生株相比,△vp2918对HeLa细胞的毒性作用显著降低;
目的 探讨姜黄素与5-氟尿嘧啶(5-FU)联用对人肝癌细胞的自噬和Yes相关蛋白(YAP)表达的影响.方法 将10 μmol/L姜黄素、10 μg/mL 5-FU单独及联用处理人肝癌HepG2细胞、过表达YAP的稳定HepG2细胞和敲低YAP的稳定HepG2细胞24h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,Western blot法检测自噬标志物微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和YAP表达的变化.结果 当两药联用后,对肿瘤细胞的增殖抑制率明显高于每个单用药组.与对照组相比,姜黄素组、5-FU组和联用组都能
目的 比较不同细胞因子组合联合抗CD3/CD28磁珠体外诱导CD8+中央记忆性T细胞(Tcm)体生成的作用,为CD8+ Tcm过继性免疫疗法的临床应用提供实验依据.方法 分离健康供者外周血单个核细胞(PBMC),应用免疫磁珠法分离纯化初始CD8+T细胞,CD3/CD28抗体偶联磁珠刺激48 h,同时根据细胞因子种类和组合进行分组:白细胞介素2(IL-2)、IL-7/IL-15、IL-7/IL-15/IL-21、IL-7/IL-15/IL-21/IL-23.采用全自动血球计数仪进行细胞计数;5,6-羧基荧光
目的 原核表达棉铃虫硫酸酯酶1(HaSulf1)蛋白,制备其多克隆抗体.方法 构建原核表达载体,诱导表达,用镍柱纯化重组蛋白,注射免疫小鼠.采血后用ELISA检测多克隆抗体的效价,Western blot法检测其免疫特异性.结果 获得重组质粒,诱导表达得到融合蛋白并成功纯化.ELISA实验检测获得的多克隆抗体效价最高可达到1∶819200.Western blot结果显示该抗体能与体外表达重组蛋白及棉铃虫体内的天然硫酸酯酶结合.结论 原核表达获得重组HaSulf1蛋白并制备了特异性的小鼠多克隆抗体.
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目的 分析患者血清中含有IgM型抗Lea、抗P1抗体联合IgG型抗E抗体的血清学检测结果及交叉配血对策.方法 采用微柱凝胶法(MGT)对患者进行血型鉴定,对有疑问的血标本采用盐水法(NS)、手工凝聚胺法(MPT)及间接抗人球蛋白试验(IAT)进行不规则抗体筛选,对抗体筛选阳性的血标本进行抗体特异性鉴定.采用NS、MPT及IAT进行交叉配血试验.结果 患者1为AB型,RhD阳性,Lea-b-,P2型,抗体筛选阳性,抗体特异性鉴定为IgM型抗Lea、抗P1抗体;患者2为A型,RhCcDee,Lea-b-,P2
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目的 构建识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)慢病毒表达载体,并使其在NK92MI细胞表达,制备识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞.方法 根据单链抗体(scFv)的序列,设计并合成CAR,构建慢病毒表达载体,将其包装、浓缩、测定滴度.然后用浓缩的慢病毒感染HEK293T细胞、Western blot法验证CD3ζ链的表达及在NK92MI细胞中的感染效率.结果 成功构建识别HBsAg的CAR慢病毒表达载体,测得滴度≥107转导单位(TU)/mL.感染NK92MI细胞后,可表达