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万寿菊黑斑病菌（Altrnaria tageitica）属于交链孢属真菌。这个属在真菌中比较常见，腐生和寄生的都有。20多年前，本人研究过的大白菜黑斑病就属于这个属，应当说在分离培养交链孢方面还是有点经验的。
本人写的《北京市万寿菊黑斑病考察纪实》发表之后（见2011年《温室园艺》第9期）。北京农林科学院生物中心的黄博找到我，说他想要筛选抗黑斑病的万寿菊，问这种病菌是否容易分离到。根据做大白菜黑斑病的经验，本人告诉他，这类病菌比较好分离。从叶片上的病斑上挑孢子就行。
2012年6月中旬，田间发病了。黄博带我到疫区采回了一些病叶（图1），让我帮他分离病菌。本人就参考分离白菜黑斑病的方法做了起来。
白菜黑斑病的病原是芸苔链格孢（Alternaria brassicae），孢子较大，很容易诱发。将大白菜病叶洗净，放在培养皿里保湿一晚上，第二天病斑表面就会出来一层直立的大孢子。在无菌室的解剖镜下用最细的昆虫针沾一些培养基，就可能粘下单个的孢子。将它移植到PDA培养基上，即可得到黑斑病的单孢子系。
拿到黄博给我的万寿菊病叶，本人就开始用这种方法分离万寿菊黑斑病菌。但是，事情并不像分离大白菜黑斑病那么简单。保湿一晚上的病叶，在解剖镜下却找不到病菌的分生孢子。
开始以为是保湿的时间不够，继续保湿。但直到叶片腐烂也没有出现那种直立在病斑上的孢子。我认为，这可能是病叶太老的原因。一周后，又去采了一些比较新鲜的病叶。经过保湿，似乎有几个孢子，但是，数量极少，根本挑不下来。
看来，同是一个属的病菌，生物学特性还不大一样。对待万寿菊黑斑病菌的分离还真得下点功夫。我跑到我们院的信息所查了一些资料。里面还真有几篇关于万寿菊黑斑病菌分离方法的文章。
我按照文献上介绍的方法，费了一段时间，得到了一些病菌的分离物，对照目前已发表的文章，其中有一类形态上很像是发生在甘肃一带的万寿菊黑斑病菌：极细链格孢（Alternaria tenuissima）（图2、图3）。我喜出望外，认为就可以交账了。但是，当我用分离到的这种菌回接到万寿菊上的时候，却出了问题。得到的这个菌，不能侵染万寿菊。
开始，我以为是接种条件的问题。增加了保湿的时间，将保湿的时间从24 h增加到48 h，还是不发病。我开始怀疑自己分离到的病菌可能不是真正的病原菌。为了找到万寿菊黑斑病真正的病原，开始在田间注意出现的各种黑霉。在整个夏天，我还真的在万寿菊上一年留下的病残及当年枯死的花蕾和枝条上发现不少交链孢属的病菌孢子。将它们洗下来进行人工接种。但是，都接种不上，分离万寿菊黑斑病菌仍然没有结果。这时，我才认识到，分离交链孢属病菌的难度，即这个属的孢子较难从形态上区别出它是寄生和腐生的，需要花时间一个个的试。
说实在的，那段时间我很怕见到黄博，更怕他问起万寿菊黑斑病菌。
后来，我想，即然病害可以得到蔓延，肯定在植株上会有孢子存在。何不用田间出现的病枝做一次诱发，将诱发出的孢子做一次人工接种。如果发病了，就证明病枝上有病菌存在。
接种时，我用的是8 个叶龄的苗子，保湿时间用了24 h、46 h、48 h三个时间。5 天过后，发现苗子发病了。结果表明，保湿 24 h即可发病。说明我使用的接种方法没有问题。但是，再仔细地一想，我转了一圈，又回到了原处。将得到的病叶还得进行组织分离，得到的仍然是许多类似细链格孢的孢子；回接在万寿菊的苗子上，仍然接种不上。
从6月开始，我们一遍遍地回接，一遍遍地失败。要进入10月了，万寿菊黑斑病的疫区开始下霜了，还是没有结果，所以非常着急。
为了有所突破，我又拿出那几篇报道万寿菊黑斑病病原菌的文章，想从中得到答案。可喜的是，从中发现了一位作者的电子邮箱。我将一张症状和一张病原的照片发给他，问他这是不是万寿菊黑斑病？是否也遇到过这类问题？问题是如何解决的？邮件没有被退回来，说明已经发到。可是，一直没有接到对方的回复。看来人家有难处。问题仍没有结果。
为了有所突破，“十一”长假期间我没有休息。在一次清理废弃的培养皿时，突然发现309号分离物的菌落上生有毛茸茸的东西，刮下菌落发现是另一种交链孢属的病菌。个体比较大，一端有一根较长的喙，形态和张天宇在中国真菌志上发表的比较相似（图4）。我小心地将其取下，接种在万寿菊的苗子上。5 天以后苗子上出现大量的小褐点（图5），回接终于成功了。这个意外的发现，使我知道，我在分离这个病菌时一开始就走错了路。
当时，我已经收集保存了50多个从万寿菊上分离到类似极细链格孢的分离物，由于回接失败，全部扔掉。重新对采集到的病样进行分离与回接。经过一年的努力，目前又收集到42 个分离物。尽管这42 个分离物它们之间在形态上并不是很一致。但是，个体都比较大。经过一番测量，和从文献上的发表的数据比较如下（见表1）：
从表1可以看到，我们早期分离到（未能接种成功）的病菌的孢子很小，与某些文献上发表的极细链格孢（Alternaria tenuissima）及石竹链格孢（Alternaria gypsophilae）有些相似。而后来分离到（接种成功）的病菌和张天宇在《中国真菌志》上记载的万寿菊链格孢十分近似。据此，我们认为在北京发生的万寿菊黑斑病应当是万寿菊链格孢（Altrnaria tagetica）。
现在回想起这个过程，觉得这种交链孢并不是很难分离。主要是自己在分离时急于求成，选错了菌落。同时也很高兴。再次地认识到做一件事儿，只要不断的坚持，就会取得成功。
本人写的《北京市万寿菊黑斑病考察纪实》发表之后（见2011年《温室园艺》第9期）。北京农林科学院生物中心的黄博找到我，说他想要筛选抗黑斑病的万寿菊，问这种病菌是否容易分离到。根据做大白菜黑斑病的经验，本人告诉他，这类病菌比较好分离。从叶片上的病斑上挑孢子就行。
2012年6月中旬，田间发病了。黄博带我到疫区采回了一些病叶（图1），让我帮他分离病菌。本人就参考分离白菜黑斑病的方法做了起来。
白菜黑斑病的病原是芸苔链格孢（Alternaria brassicae），孢子较大，很容易诱发。将大白菜病叶洗净，放在培养皿里保湿一晚上，第二天病斑表面就会出来一层直立的大孢子。在无菌室的解剖镜下用最细的昆虫针沾一些培养基，就可能粘下单个的孢子。将它移植到PDA培养基上，即可得到黑斑病的单孢子系。
拿到黄博给我的万寿菊病叶，本人就开始用这种方法分离万寿菊黑斑病菌。但是，事情并不像分离大白菜黑斑病那么简单。保湿一晚上的病叶，在解剖镜下却找不到病菌的分生孢子。
开始以为是保湿的时间不够，继续保湿。但直到叶片腐烂也没有出现那种直立在病斑上的孢子。我认为，这可能是病叶太老的原因。一周后，又去采了一些比较新鲜的病叶。经过保湿，似乎有几个孢子，但是，数量极少，根本挑不下来。
看来，同是一个属的病菌，生物学特性还不大一样。对待万寿菊黑斑病菌的分离还真得下点功夫。我跑到我们院的信息所查了一些资料。里面还真有几篇关于万寿菊黑斑病菌分离方法的文章。
我按照文献上介绍的方法，费了一段时间，得到了一些病菌的分离物，对照目前已发表的文章，其中有一类形态上很像是发生在甘肃一带的万寿菊黑斑病菌：极细链格孢（Alternaria tenuissima）（图2、图3）。我喜出望外，认为就可以交账了。但是，当我用分离到的这种菌回接到万寿菊上的时候，却出了问题。得到的这个菌，不能侵染万寿菊。
开始，我以为是接种条件的问题。增加了保湿的时间，将保湿的时间从24 h增加到48 h，还是不发病。我开始怀疑自己分离到的病菌可能不是真正的病原菌。为了找到万寿菊黑斑病真正的病原，开始在田间注意出现的各种黑霉。在整个夏天，我还真的在万寿菊上一年留下的病残及当年枯死的花蕾和枝条上发现不少交链孢属的病菌孢子。将它们洗下来进行人工接种。但是，都接种不上，分离万寿菊黑斑病菌仍然没有结果。这时，我才认识到，分离交链孢属病菌的难度，即这个属的孢子较难从形态上区别出它是寄生和腐生的，需要花时间一个个的试。
说实在的，那段时间我很怕见到黄博，更怕他问起万寿菊黑斑病菌。
后来，我想，即然病害可以得到蔓延，肯定在植株上会有孢子存在。何不用田间出现的病枝做一次诱发，将诱发出的孢子做一次人工接种。如果发病了，就证明病枝上有病菌存在。
接种时，我用的是8 个叶龄的苗子，保湿时间用了24 h、46 h、48 h三个时间。5 天过后，发现苗子发病了。结果表明，保湿 24 h即可发病。说明我使用的接种方法没有问题。但是，再仔细地一想，我转了一圈，又回到了原处。将得到的病叶还得进行组织分离，得到的仍然是许多类似细链格孢的孢子；回接在万寿菊的苗子上，仍然接种不上。
从6月开始，我们一遍遍地回接，一遍遍地失败。要进入10月了，万寿菊黑斑病的疫区开始下霜了，还是没有结果，所以非常着急。
为了有所突破，我又拿出那几篇报道万寿菊黑斑病病原菌的文章，想从中得到答案。可喜的是，从中发现了一位作者的电子邮箱。我将一张症状和一张病原的照片发给他，问他这是不是万寿菊黑斑病？是否也遇到过这类问题？问题是如何解决的？邮件没有被退回来，说明已经发到。可是，一直没有接到对方的回复。看来人家有难处。问题仍没有结果。
为了有所突破，“十一”长假期间我没有休息。在一次清理废弃的培养皿时，突然发现309号分离物的菌落上生有毛茸茸的东西，刮下菌落发现是另一种交链孢属的病菌。个体比较大，一端有一根较长的喙，形态和张天宇在中国真菌志上发表的比较相似（图4）。我小心地将其取下，接种在万寿菊的苗子上。5 天以后苗子上出现大量的小褐点（图5），回接终于成功了。这个意外的发现，使我知道，我在分离这个病菌时一开始就走错了路。
当时，我已经收集保存了50多个从万寿菊上分离到类似极细链格孢的分离物，由于回接失败，全部扔掉。重新对采集到的病样进行分离与回接。经过一年的努力，目前又收集到42 个分离物。尽管这42 个分离物它们之间在形态上并不是很一致。但是，个体都比较大。经过一番测量，和从文献上的发表的数据比较如下（见表1）：
从表1可以看到，我们早期分离到（未能接种成功）的病菌的孢子很小，与某些文献上发表的极细链格孢（Alternaria tenuissima）及石竹链格孢（Alternaria gypsophilae）有些相似。而后来分离到（接种成功）的病菌和张天宇在《中国真菌志》上记载的万寿菊链格孢十分近似。据此，我们认为在北京发生的万寿菊黑斑病应当是万寿菊链格孢（Altrnaria tagetica）。
现在回想起这个过程，觉得这种交链孢并不是很难分离。主要是自己在分离时急于求成，选错了菌落。同时也很高兴。再次地认识到做一件事儿，只要不断的坚持，就会取得成功。