【摘 要】
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运用SMART(Switching Mechanism at 5end of RNA Transcript)技术构建海南黄牛外周血白细胞cDNA文库.采用RNAiso Reagent处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA
【机 构】
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海南大学农学院 海口,570228;海南大学农学院 海口,570228;华中师范大学生命科学学院,武汉,430079;华中师范大学生命科学学院,武汉,430079;
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运用SMART(Switching Mechanism at 5end of RNA Transcript)技术构建海南黄牛外周血白细胞cDNA文库.采用RNAiso Reagent处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA.用PowerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,SfiⅠ酶切和CHR0MA SPIN-400TM柱分离后,500 bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入Ecoli.DH5α,建成原始文库.经鉴定,库容量达到1.2×106克隆,原始文库滴度为3×109cfu/mL,扩增后的文库滴度为4.3×1010 cfu/mL.PCR鉴定重组子,发现重组率接近100%,插入片段大小分布为0.5～2 kb,插入片段平均长度约为1 kb.文库的各项指标均达要求,为利用文库筛选海南黄牛已知和未知功能基因提供了材料来源,且为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础.
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