【摘 要】
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为优化葡萄分枝基因VvBRC3的原核表达条件,本研究分析了该蛋白的基本理化性质、二级结构、稀有密码子和蛋白质结构模型等生物信息学特性,将克隆得到的VvBRC3全长序列和含有TCP、R结构域的截短序列均连接至pET30a和pGEX4T-1载体,构建得到四种原核表达载体.从诱导剂浓度、诱导时间(终OD600值)、初始菌体OD600值、诱导温度4个方面对截短基因表达条件进行优化.结果 表明:VvBRC3蛋白含有376个氨基酸,理论等电点为6.51,属于不稳定蛋白,含有TCP结构域、R结构域,具有螺旋-环-螺旋的
【机 构】
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西北农林科技大学葡萄酒学院,杨凌,712100
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为优化葡萄分枝基因VvBRC3的原核表达条件,本研究分析了该蛋白的基本理化性质、二级结构、稀有密码子和蛋白质结构模型等生物信息学特性,将克隆得到的VvBRC3全长序列和含有TCP、R结构域的截短序列均连接至pET30a和pGEX4T-1载体,构建得到四种原核表达载体.从诱导剂浓度、诱导时间(终OD600值)、初始菌体OD600值、诱导温度4个方面对截短基因表达条件进行优化.结果 表明:VvBRC3蛋白含有376个氨基酸,理论等电点为6.51,属于不稳定蛋白,含有TCP结构域、R结构域,具有螺旋-环-螺旋的结构特征,且稀有密码子较多.但VvBRC3全长基因无法表达,截短基因可以表达且截短蛋白可溶.菌体密度OD600为0.3时,加入0.1 mmol/L的IPTG,于16℃下诱导至终OD600为1.2～1.4,是该截短基因的最佳表达条件.本研究成功构建了截短的VvBRC3原核表达载体,并优化其表达条件.
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