大菱鲆神经肽Y基因克隆及其在工厂化养殖饥饿-投喂策略中的表达特征分析

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本文通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和末端快速扩增技术(RACE)克隆了大菱鲆神经肽Y(NPY)基因全长为729 bp的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列,其中5′非翻译区(5′-UTR)为70 bp,3′非翻译区(3′-UTR)为359 bp,开放阅读框(ORF)为300 bp。ORF编码含有99个氨基酸的蛋白质多肽,N端28个氨基酸为信号肽,信号肽后是由36个氨基酸组成的NPY成熟肽。针对大菱鲆NPY蛋白质与其他物种的同源性进行比较,结果显示大菱鲆NPY与其他物种的同源性在53.9%~98%,特别是与同属于鲆鲽鱼类的牙鲆和美洲拟鲽的同源性高达97%~98%,表现出很高的保守性。采用实时定量PCR对大菱鲆NPY基因的表达特征进行分析,结果表明,大菱鲆NPY基因在神经组织和外围组织中都有表达,其中在下丘脑中的表达量最高。饥饿实验中,随着饥饿的进行,NPY的表达量显著变化(P<0.05),呈现先升高再降低,再显著升高并维持一段高水平表达后,再次下降的趋势,饥饿后再投喂会使NPY的表达量升高,并且饥饿时间越长,再投喂后NPY的表达水平越高,但是再投喂2 h后表达量还会再次下降至相似的水平,这都预示着NPY是一种摄食刺激因子,并且是一种短期的调控机制。
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