【摘 要】
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目的:观察沉默胚胎致死性异常视觉1(embryonic lethal abnormal visionlike 1,ELAVL1)基因表达对前列腺癌PC-3细胞生长的影响,并探讨可能的分子作用机制.方法:分别采用实时荧
【机 构】
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甘肃省人民医院泌尿外科,甘肃兰州730000;四川大学华西医院泌尿外科,四川成都610041
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目的:观察沉默胚胎致死性异常视觉1(embryonic lethal abnormal visionlike 1,ELAVL1)基因表达对前列腺癌PC-3细胞生长的影响,并探讨可能的分子作用机制.方法:分别采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法、免疫组织化学法及免疫荧光法检测前列腺癌PC-3和正常前列腺上皮RWPE-1细胞中ELAVL1 mRNA和蛋白的表达水平并定位.将携带有特异性针对ELA VL1基因-shRNA (shELAVL1)的重组腺病毒Ad5-shELAVL1-GFP感染PC-3细胞以沉默ELAVL1基因的表达,同时以腺病毒空载体Ad5-GFP感染PC-3细胞作为对照组.通过CCK-8法检测细胞的增殖能力,FCM检测细胞周期,蛋白质印迹法检测PC-3细胞中环氧合酶2(cyclooxygenase-2,Cox-2)、细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)和磷酸化-AKT (phospho-Akt,p-AKT)蛋白的表达水平.建立PC-3细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予瘤内注射Ad5-shELAVL1-GFP、Ad5-GFP(对照组)及0.9％氯化钠溶液(空白对照组),观察移植瘤的生长情况.结果:PC-3细胞中ELAVL1 mRNA和蛋白的表达水平均高于RWPE-1细胞(P值均＜ 0.001);ELAVL1蛋白在PC-3细胞中主要表达于细胞质中,在RWPE-1细胞中则主要表达于细胞核中.沉默ELAVL1基因表达后,与对照组相比,PC-3细胞的增殖能力明显下降,G1期细胞所占百分比明显提高,而G2期细胞所占百分比明显减少(P值均＜0.05);同时,与细胞增殖有关的分子cyclin D1和Cox-2蛋白的表达水平明显降低,PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及p-AKT的蛋白表达也明显下调(P值均＜0.05).与对照组相比,裸鼠移植瘤在经过Ad5-shELAVL1-GFP处理后移植瘤的生长减缓,移植瘤的体积和质量明显减小(P值均＜0.05).结论:ELAVL1蛋白在前列腺癌PC-3细胞中高表达且主要表达于细胞质中;ELAVL1蛋白可能通过PI3K/AKT经典肿瘤信号通路对前列腺癌细胞的生长起着促进作用.
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