论文部分内容阅读
目的：采用原核表达系统对颗粒溶素（granulysin，GNLY）进行体外表达，纯化及活性鉴定。方法：以体外培养的人外周血单个核细胞（PBMC）为模板，RT-PCR扩增编码GNLY的cDNA片段，插入pMD-18-T载体，测序正确后再亚克隆到质粒pET28a（＋）中，构建重组表达质粒pET28a（＋）-GNLY，转化大肠杆菌BL21（DE3）plysS，IPTG诱导表达融合蛋白，包涵体经变复性后用Ni亲和层析纯化，CFU法测定蛋白活性。结果：成功地将GNLY cDNA片段插入载体pET28a（＋）中，构建