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摘要 [目的]研究“贝吉佳”草莓组培生根环境，并对组培苗进行驯化移栽。[方法]以“贝吉佳”草莓匍匐茎茎尖为外植体，研究其生根的影响因素及移栽基质对成活率的影响。 [结果]最佳的生根培养基浓度为1/2MS，生根率可达100%；IBA的生根效果优于IAA，当IBA浓度为0.3 mg/L时生根效果最好，根粗壮，须根最多；活性炭浓度为0.5 g/L，最适合“贝吉佳”草莓根的生长。组培苗的驯化中，珍珠岩和蛭石组合基质的成活率明显高于腐殖土和沙子的基质组合，成活率最高可达98.1%（珍珠岩∶ 蛭石=1∶ 1），在各种基质上的苗均可以正常开花结果、正常抽生匍匐茎。[结论] 为实现“贝吉佳”草莓脱毒苗的规模化生产和快速培育优良种苗提供技术支持。
关键词 “贝吉佳”草莓；培养基浓度；生长素；活性炭；移栽基质
中图分类号 S604+.3 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）18-049-03
草莓（Fragaria ananassa Duch.）是蔷薇科草莓属多年生草本植物，别名洋莓、地果、士多啤梨等，是当今世界七大水果之一。草莓的果实既可以鲜食也可以加工成果浆、果汁、果酒、罐头[1]。草莓的果实色泽鲜艳、酸甜适口，有机酸和维生素含量居水果之首，且具有丰富的营养和生理活性成分[2-6]。草莓适应性广，栽培简单，果实营养价值高，适合在我国大部分地区种植。传统方式（种子繁殖、匍匐茎繁殖、母株分株繁殖）生产下的草莓，因连作和长期营养繁殖而导致植株体内各种病毒的积累，造成果实品质下降，从而降低其经济价值和商品价值[7]。而组织培养方法建立的草莓快繁系统，不仅不受时间与地点限制，繁殖系数高，成活率高，生长旺盛，并且可以预防病毒病，省时省力[8-10]。 “贝吉佳”草莓引自日本，结果早，成熟快，产量高，品质优，抗病性强，货架期长，但植株价格昂贵，经多年栽植后，由于感染病毒使植株个体矮化、品质变劣、畸形果多、产量降低。笔者对其组培生根环境进行了初步研究，并对组培苗进行驯化移栽，为实现“贝吉佳”草莓脱毒苗的规模化生产和快速培育优良种苗提供技术支持。
1 材料与方法
1.1 试验材料 供试材料采自于吉林省图们市凉水镇的草莓新生匍匐茎。用流水冲洗30 min，用75%乙醇浸泡50 s，无菌水冲洗4～5次后用0.1%的氯化汞消毒6～8 min并不断搅拌，再用无菌水冲洗5～6次。在超净工作台上在实体显微镜下剥取茎尖0.2～0.4 mm，接种于MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L （pH 5.80）培养基上以获得脱毒组培苗。
1.2 试验方法
1.2.1 MS浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响。无菌条件下，将相同大小的芽分别接种在1/4MS、1/2MS、3/4MS、MS培养基上，分别加入30 g/L的蔗糖和7 g/L的琼脂，pH调节为5.8。每瓶接入3个相同大小（高约1 cm，带3片叶子）的芽，培养温度（25±2） ℃，相对湿度70%，光照强度1 600 lx，光照时间16 h/d。每个处理重复3次，25 d后调查草莓苗的生根情况。
1.2.2 生长素种类及浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响。无菌条件下，将相同大小的草莓苗分别接种在1/2MS+蔗糖30 g/L+琼脂7.0 g/L的培养基上（pH 5.8），IBA和IAA浓度分别设置为0、0.1、0.3、0.5、0.7 mg/L。其他培养条件与方法同“1.2.1”。
1.2.3 活性炭浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响。无菌条件下，将相同大小的草莓苗分别接种在1/2MS+IBA 0.3 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂7.0 g/L的培养基上（pH 5.8），分别加入不同浓度的活性炭：0、0.5、1.0、1.5、2.0 g/L。其他培养条件与方法同“1.2.1”。
1.2.4 移栽基质对“贝吉佳”草莓驯化的影响。将生根的草莓组培苗（株高约5 cm）逐渐开盖，保持环境湿度。5 d后，移栽到营养盘[L（长）×W（宽）×H（高）=（56×32×5） cm3，54穴，直径Φ 6 cm]中，基质（移栽前1 d将基质浇透）分别设置为沙子（A）、腐质土（B）、沙子：腐质土=1∶ 1（C）、珍珠岩∶ 蛭石=2∶ 1（D）、珍珠岩∶ 蛭石=1∶ 1（E）、珍珠岩∶ 蛭石=1∶ 2（F）。放置在向阳的地方搭棚，保持相对湿度在85%以上，覆盖透明塑料，晴天时在塑料外遮盖遮阳网并逐渐减少遮盖时间，直到全部撤去遮阳网。5 d后，逐渐撤去塑料布，观察草莓植株生长情况，20 d后调查成活率及生长状况。
2 结果与分析
2.1 MS浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响 不同MS培养基浓度对草莓苗生根有不同的影响。随着MS浓度的增加，植株地上部鲜重逐渐增加，而根的鲜重呈先增后降的趋势（表1）。培养基为1/4MS时植株矮小，长势弱，生成的根稀疏、细小，但生根率高达99.4%。培养基为1/2MS时根长达到2.8 cm，与株高比例适宜，此时根的鲜重达最高89.0 mg，根多为白绿色，且较其他浓度的粗壮，生根数最多达12.0，植株生长健壮，生根率达到100%。从3/4MS开始，随着MS浓度的增加根逐渐变短、变稀疏，鲜重也随之降低，根长势不如 1/2MS，生根率也随之降低。培养基为MS时生根相对较少且短，生根率和鲜重也大大降低（图1）。
2.2 生长素种类及浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响 随着IBA浓度的增加植株地上部分和根的长势呈先增后减的趋势。当IBA浓度为0.3 mg/L时，植株根鲜重、干重均达最大值，生根较多且粗壮，根长4.5 cm（表2）。当IBA浓度继续增加时，根的长势随之下降。而加入IAA时，随着IAA浓度的增加地上部和根则呈先增后减的趋势。当IAA浓度为0.1 mg/L时，地上部分和根的长势均与对照相比达到显著水平。而IBA与IAA相比，IBA 0.3 mg/L时比IAA 0.1 mg/L时根数多且粗壮，而IAA整体根系都相对较细（图2），因此IBA浓度为0.3 mg/L时最佳。 2.3 活性炭浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响 随着活性炭浓度的增加植株地上部分鲜重逐渐减少，而根的鲜重、干重、根数在浓度超过0.5 g/L时随着浓度的增加逐渐降低，当浓度达到1.0 g/L时根长达到最长（表3）。当没有活性炭时，植株根颜色发暗，植株高但长势弱。当浓度为0.5 g/L时，根的鲜重、干重与对照相比均达到显著水平，植株直立健壮、生长旺盛，须根最多且为白绿色（图3）。随着活性炭浓度的增加根逐渐变细，根数目也逐渐降低，当活性炭浓度为2.0 g/L时，根长仅为2.2 cm，生根率为92.1%。
2.4 移栽基质对“贝吉佳”草莓成活率的影响 以腐质土和沙子为基质的3种组合处理成活率低于其他3种用珍珠岩和蛭石的处理，其中以B（腐殖土）为基质成活率最低68.5%，其次是C（沙子：腐殖土=1：1）、A沙子；以珍珠岩和蛭石组合为基质的处理，成活率最低的为F（珍珠岩：蛭石=1：2）90.7%，最高为E（珍珠岩：蛭石=1：1）98.1%（图4）。在有腐殖土的基质上生长的草莓苗比珍珠岩和蛭石为基质的生长健壮，叶片大、颜色深绿，但从成活率来看珍珠岩和蛭石为基质更适合“贝吉佳”草莓组培苗的移栽驯化（图5）。草莓匍匐茎的形成需要的根部空间不大，根部空间越大反而不容易形成匍匐茎，因此不需要对驯化苗进行移栽，对30 d的驯化苗每隔3 d进行营养液浇灌处理，并对其进行观察，珍珠岩和蛭石作为基质的草莓苗逐渐变健壮，叶片变大，颜色变深，茎逐渐变粗，与腐殖土处理的相当（图6）。90 d后（2013年3月）长出8片叶子的驯化苗开始抽生匍匐茎并长出花芽开花（图7）。匍匐茎的抽生首先从腐殖土基质上发生，而珍珠岩和蛭石组合比腐殖土晚15 d左右。120 d后草莓苗大量开花并结果。
3 讨论
组培苗的生根是组培试验的关键也是重点之一。该试验对培养基MS浓度进行了筛选，结果表明，1/2MS培养基适宜“贝吉佳”草莓的生根。随着MS浓度的增加植株地上部分的鲜重干重也随之增加，而根部则出现了先增后降的趋势，当培养基为1/2MS时根的鲜重、根数达到显著水平。原因可能是随着浓度的增加营养也随着增加，而根的发生不需要太多营养，营养过多或营养过低都会抑制生根。生长素IBA和IAA对草莓生根都有促进效果，梁贵秋等[10]研究发现影响主根生长的为IAA，而影响侧根生长的则为IBA，而该试验结果也说明了这一点，IBA处理整体根的数目比IAA处理多，虽然IAA处理根的长度长于IBA处理，但IAA处理根细于IBA处理，因此IBA处理生根优于IAA。活性炭在组织培养中应用广泛，它可以吸收培养基和植株生长产生的有害物质，为植株生长提供暗环境，利于生根；在初代培养中能防止发生褐化[11]。该研究表明，加入活性炭的根颜色明显优于没有加的处理，颜色白绿色，活性大，这说明活性炭能吸附对根生长产生抑制作用的物质。移植驯化是组培试验的最后一步，该试验6组基质中珍珠岩：蛭石=1：1是最适宜的移栽基质，成活率接近100%。虽然在珍珠岩和蛭石的组合基质上植株生长小，比加有腐殖土的生长要弱很多，但从成活率看还是选择珍珠岩∶ 蛭石=1∶ 1，这与孙永平等[12]对草莓驯化的研究结果一致。
参考文献
[1] 梁贵秋，唐燕梅.草莓的组织培养和快速繁殖[J].广西热带农业，2004（6）：8-9.
[2] 罗学兵，贺良明.草莓的营养价值与保健功能[J].中国食物与营养，2011，17 （4）：74-76.
[3] 沙春艳.5个草莓品种果实品质的比较研究[J].中国林副特产，2012，4（2）：117-120.
[4] 张墨英，滕玉萍.草莓酚类和褐变度的研究[J].食品科学，1992（9）：9-13.
[5] 郑虎哲，LEE HYE-RYUN，崔春兰，等.草莓中黄酮类物质的测定以及与抗氧化活性之间的相互关系[J].云南植物研究，2008，30 （1）：125-128.
[6] 李志洲，刘军海.草莓中黄酮的提取及其抗氧化性研究[J].食品研究与开发，2007，28 （7）：31-33.
[7] 吕树立，孙喜云，周玉玲，等.草莓组织培养与快速繁殖技术[J].山东农业科学，2010（3）：109-110.
[8] 盛红萍，申屠念.草莓的组织培养和快速繁殖[J].蔬菜，2001（8）：15-16.
[9] 王国平，刘福昌，薛光荣，等.草莓病毒种类鉴定及培育无病毒种苗技研究[J].中国农业科学，1990，23 （4）：43-49.
[10] 梁贵秋，唐燕梅.草莓的组织培养和快速繁殖[J].广西热带农业，2004（6）：8-9.
[11] 王红梅.活性炭在植物组织培养中的应用[J].上海农业科技，2011（4）：19-21.
[12] 孙永平，高年春，张琼，等.红颊草莓组培快繁技术研究[J].江苏农业科学，2011，39（5）：63-64.[9] 和秀云，毕海林，薛润光，等.草莓‘托特母’的组培快繁技术研究[J].西南农业学报，2013（2）：701-704.
关键词 “贝吉佳”草莓；培养基浓度；生长素；活性炭；移栽基质
中图分类号 S604+.3 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）18-049-03
草莓（Fragaria ananassa Duch.）是蔷薇科草莓属多年生草本植物，别名洋莓、地果、士多啤梨等，是当今世界七大水果之一。草莓的果实既可以鲜食也可以加工成果浆、果汁、果酒、罐头[1]。草莓的果实色泽鲜艳、酸甜适口，有机酸和维生素含量居水果之首，且具有丰富的营养和生理活性成分[2-6]。草莓适应性广，栽培简单，果实营养价值高，适合在我国大部分地区种植。传统方式（种子繁殖、匍匐茎繁殖、母株分株繁殖）生产下的草莓，因连作和长期营养繁殖而导致植株体内各种病毒的积累，造成果实品质下降，从而降低其经济价值和商品价值[7]。而组织培养方法建立的草莓快繁系统，不仅不受时间与地点限制，繁殖系数高，成活率高，生长旺盛，并且可以预防病毒病，省时省力[8-10]。 “贝吉佳”草莓引自日本，结果早，成熟快，产量高，品质优，抗病性强，货架期长，但植株价格昂贵，经多年栽植后，由于感染病毒使植株个体矮化、品质变劣、畸形果多、产量降低。笔者对其组培生根环境进行了初步研究，并对组培苗进行驯化移栽，为实现“贝吉佳”草莓脱毒苗的规模化生产和快速培育优良种苗提供技术支持。
1 材料与方法
1.1 试验材料 供试材料采自于吉林省图们市凉水镇的草莓新生匍匐茎。用流水冲洗30 min，用75%乙醇浸泡50 s，无菌水冲洗4～5次后用0.1%的氯化汞消毒6～8 min并不断搅拌，再用无菌水冲洗5～6次。在超净工作台上在实体显微镜下剥取茎尖0.2～0.4 mm，接种于MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L （pH 5.80）培养基上以获得脱毒组培苗。
1.2 试验方法
1.2.1 MS浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响。无菌条件下，将相同大小的芽分别接种在1/4MS、1/2MS、3/4MS、MS培养基上，分别加入30 g/L的蔗糖和7 g/L的琼脂，pH调节为5.8。每瓶接入3个相同大小（高约1 cm，带3片叶子）的芽，培养温度（25±2） ℃，相对湿度70%，光照强度1 600 lx，光照时间16 h/d。每个处理重复3次，25 d后调查草莓苗的生根情况。
1.2.2 生长素种类及浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响。无菌条件下，将相同大小的草莓苗分别接种在1/2MS+蔗糖30 g/L+琼脂7.0 g/L的培养基上（pH 5.8），IBA和IAA浓度分别设置为0、0.1、0.3、0.5、0.7 mg/L。其他培养条件与方法同“1.2.1”。
1.2.3 活性炭浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响。无菌条件下，将相同大小的草莓苗分别接种在1/2MS+IBA 0.3 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂7.0 g/L的培养基上（pH 5.8），分别加入不同浓度的活性炭：0、0.5、1.0、1.5、2.0 g/L。其他培养条件与方法同“1.2.1”。
1.2.4 移栽基质对“贝吉佳”草莓驯化的影响。将生根的草莓组培苗（株高约5 cm）逐渐开盖，保持环境湿度。5 d后，移栽到营养盘[L（长）×W（宽）×H（高）=（56×32×5） cm3，54穴，直径Φ 6 cm]中，基质（移栽前1 d将基质浇透）分别设置为沙子（A）、腐质土（B）、沙子：腐质土=1∶ 1（C）、珍珠岩∶ 蛭石=2∶ 1（D）、珍珠岩∶ 蛭石=1∶ 1（E）、珍珠岩∶ 蛭石=1∶ 2（F）。放置在向阳的地方搭棚，保持相对湿度在85%以上，覆盖透明塑料，晴天时在塑料外遮盖遮阳网并逐渐减少遮盖时间，直到全部撤去遮阳网。5 d后，逐渐撤去塑料布，观察草莓植株生长情况，20 d后调查成活率及生长状况。
2 结果与分析
2.1 MS浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响 不同MS培养基浓度对草莓苗生根有不同的影响。随着MS浓度的增加，植株地上部鲜重逐渐增加，而根的鲜重呈先增后降的趋势（表1）。培养基为1/4MS时植株矮小，长势弱，生成的根稀疏、细小，但生根率高达99.4%。培养基为1/2MS时根长达到2.8 cm，与株高比例适宜，此时根的鲜重达最高89.0 mg，根多为白绿色，且较其他浓度的粗壮，生根数最多达12.0，植株生长健壮，生根率达到100%。从3/4MS开始，随着MS浓度的增加根逐渐变短、变稀疏，鲜重也随之降低，根长势不如 1/2MS，生根率也随之降低。培养基为MS时生根相对较少且短，生根率和鲜重也大大降低（图1）。
2.2 生长素种类及浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响 随着IBA浓度的增加植株地上部分和根的长势呈先增后减的趋势。当IBA浓度为0.3 mg/L时，植株根鲜重、干重均达最大值，生根较多且粗壮，根长4.5 cm（表2）。当IBA浓度继续增加时，根的长势随之下降。而加入IAA时，随着IAA浓度的增加地上部和根则呈先增后减的趋势。当IAA浓度为0.1 mg/L时，地上部分和根的长势均与对照相比达到显著水平。而IBA与IAA相比，IBA 0.3 mg/L时比IAA 0.1 mg/L时根数多且粗壮，而IAA整体根系都相对较细（图2），因此IBA浓度为0.3 mg/L时最佳。 2.3 活性炭浓度对“贝吉佳”草莓苗生根的影响 随着活性炭浓度的增加植株地上部分鲜重逐渐减少，而根的鲜重、干重、根数在浓度超过0.5 g/L时随着浓度的增加逐渐降低，当浓度达到1.0 g/L时根长达到最长（表3）。当没有活性炭时，植株根颜色发暗，植株高但长势弱。当浓度为0.5 g/L时，根的鲜重、干重与对照相比均达到显著水平，植株直立健壮、生长旺盛，须根最多且为白绿色（图3）。随着活性炭浓度的增加根逐渐变细，根数目也逐渐降低，当活性炭浓度为2.0 g/L时，根长仅为2.2 cm，生根率为92.1%。
2.4 移栽基质对“贝吉佳”草莓成活率的影响 以腐质土和沙子为基质的3种组合处理成活率低于其他3种用珍珠岩和蛭石的处理，其中以B（腐殖土）为基质成活率最低68.5%，其次是C（沙子：腐殖土=1：1）、A沙子；以珍珠岩和蛭石组合为基质的处理，成活率最低的为F（珍珠岩：蛭石=1：2）90.7%，最高为E（珍珠岩：蛭石=1：1）98.1%（图4）。在有腐殖土的基质上生长的草莓苗比珍珠岩和蛭石为基质的生长健壮，叶片大、颜色深绿，但从成活率来看珍珠岩和蛭石为基质更适合“贝吉佳”草莓组培苗的移栽驯化（图5）。草莓匍匐茎的形成需要的根部空间不大，根部空间越大反而不容易形成匍匐茎，因此不需要对驯化苗进行移栽，对30 d的驯化苗每隔3 d进行营养液浇灌处理，并对其进行观察，珍珠岩和蛭石作为基质的草莓苗逐渐变健壮，叶片变大，颜色变深，茎逐渐变粗，与腐殖土处理的相当（图6）。90 d后（2013年3月）长出8片叶子的驯化苗开始抽生匍匐茎并长出花芽开花（图7）。匍匐茎的抽生首先从腐殖土基质上发生，而珍珠岩和蛭石组合比腐殖土晚15 d左右。120 d后草莓苗大量开花并结果。
3 讨论
组培苗的生根是组培试验的关键也是重点之一。该试验对培养基MS浓度进行了筛选，结果表明，1/2MS培养基适宜“贝吉佳”草莓的生根。随着MS浓度的增加植株地上部分的鲜重干重也随之增加，而根部则出现了先增后降的趋势，当培养基为1/2MS时根的鲜重、根数达到显著水平。原因可能是随着浓度的增加营养也随着增加，而根的发生不需要太多营养，营养过多或营养过低都会抑制生根。生长素IBA和IAA对草莓生根都有促进效果，梁贵秋等[10]研究发现影响主根生长的为IAA，而影响侧根生长的则为IBA，而该试验结果也说明了这一点，IBA处理整体根的数目比IAA处理多，虽然IAA处理根的长度长于IBA处理，但IAA处理根细于IBA处理，因此IBA处理生根优于IAA。活性炭在组织培养中应用广泛，它可以吸收培养基和植株生长产生的有害物质，为植株生长提供暗环境，利于生根；在初代培养中能防止发生褐化[11]。该研究表明，加入活性炭的根颜色明显优于没有加的处理，颜色白绿色，活性大，这说明活性炭能吸附对根生长产生抑制作用的物质。移植驯化是组培试验的最后一步，该试验6组基质中珍珠岩：蛭石=1：1是最适宜的移栽基质，成活率接近100%。虽然在珍珠岩和蛭石的组合基质上植株生长小，比加有腐殖土的生长要弱很多，但从成活率看还是选择珍珠岩∶ 蛭石=1∶ 1，这与孙永平等[12]对草莓驯化的研究结果一致。
参考文献
[1] 梁贵秋，唐燕梅.草莓的组织培养和快速繁殖[J].广西热带农业，2004（6）：8-9.
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[4] 张墨英，滕玉萍.草莓酚类和褐变度的研究[J].食品科学，1992（9）：9-13.
[5] 郑虎哲，LEE HYE-RYUN，崔春兰，等.草莓中黄酮类物质的测定以及与抗氧化活性之间的相互关系[J].云南植物研究，2008，30 （1）：125-128.
[6] 李志洲，刘军海.草莓中黄酮的提取及其抗氧化性研究[J].食品研究与开发，2007，28 （7）：31-33.
[7] 吕树立，孙喜云，周玉玲，等.草莓组织培养与快速繁殖技术[J].山东农业科学，2010（3）：109-110.
[8] 盛红萍，申屠念.草莓的组织培养和快速繁殖[J].蔬菜，2001（8）：15-16.
[9] 王国平，刘福昌，薛光荣，等.草莓病毒种类鉴定及培育无病毒种苗技研究[J].中国农业科学，1990，23 （4）：43-49.
[10] 梁贵秋，唐燕梅.草莓的组织培养和快速繁殖[J].广西热带农业，2004（6）：8-9.
[11] 王红梅.活性炭在植物组织培养中的应用[J].上海农业科技，2011（4）：19-21.
[12] 孙永平，高年春，张琼，等.红颊草莓组培快繁技术研究[J].江苏农业科学，2011，39（5）：63-64.[9] 和秀云，毕海林，薛润光，等.草莓‘托特母’的组培快繁技术研究[J].西南农业学报，2013（2）：701-704.