【摘 要】
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木糖醇脱氢酶(xylitol dehydrogenase,XDH)可以氧化木糖醇生成木酮糖,处于木糖代谢的节点位置。利用PCR方法克隆得到了休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)20335的木糖醇脱氢酶
【机 构】
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黑龙江大学生命科学学院微生物省高校重点实验室,农业微生物技术教育工程研究中心
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31270143);国家自然科学基金项目(31270534);国家自然科学基金项目(31470537);黑龙江省高等学校科技创新团队(农业微生物发酵技术)项目(2012td009)
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木糖醇脱氢酶(xylitol dehydrogenase,XDH)可以氧化木糖醇生成木酮糖,处于木糖代谢的节点位置。利用PCR方法克隆得到了休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)20335的木糖醇脱氢酶基因、质粒p KT0150的ADH1终止子序列和G418抗性基因(KanR),以及酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W5特定的2.2 kb的r DNA片段。以酿酒酵母整合载体p406ADH1为骨架,利用基因工程手段构建一个多拷贝整合表达载体p LXAGRX。将重组载体p LX-AGRX线性化转入到酿酒酵母W5后,通过高浓度G418筛选和PCR双重鉴定,证实重组载体p LX-AGRX已整合到酿酒酵母W5基因组上,测定木糖醇脱氢酶酶活可达65.957 4 U/mg。
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