梯度pH共沉淀法回收人工肝丢弃血浆蛋白初步实验

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目的 建立在体外快速回收人工肝丢弃血浆总蛋白的方法.方法 设计一种梯度pH共沉淀法,从pH 7.3开始,逐滴加入1 mol/L柠檬酸溶液,5 h加完,使溶液pH值呈渐进梯度变化,至终点pH 5.1,用此法配合盐析法(氯化钠饱和度33%,4 ℃反应5.5 h)或低温乙醇沉淀法(乙醇体积分数为0.04,-7 ℃反应5.5 h),使等电点在pH 7.3~5.1范围内的各蛋白连环碰撞聚集而析出,形成多蛋白共沉淀,再一并回收,弃上清液以清除毒物.结果 在pH 7.3~5.1范围内,用梯度pH低温乙醇法和梯度pH盐析法分别回收了41%(25 g/61 g)和50%(29 g/57 g)的血浆蛋白,上清液中未回收的蛋白主要是白蛋白及其所结合的胆红素.两法回收的蛋白溶液中,TBil下降,分别为回收前的0.07%(低温乙醇法)和0.06%(盐析法),HBV DNA降为阴性(PCR).结论 在高浓度中性盐或低温乙醇条件下,渐进微调溶液pH值,可使一连串有相邻等电点的蛋白共沉淀,采用梯度pH共沉淀法可选择性快速回收人工肝丢弃血浆中总蛋白.
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