【摘 要】
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构建pET表达载体,通过原核表达系统制备甲型H1N1流感病毒HA的截短表达蛋白,获得纯化蛋白,并分析HA蛋白的反应原性。人工合成A/California/04/2009 H1N1流感病毒HA基因,以其为
【机 构】
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吉林农业大学; 中国农业科学院上海兽医研究所;
【基金项目】
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上海市科技兴农重点攻关项目(2009第5-2号)
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构建pET表达载体,通过原核表达系统制备甲型H1N1流感病毒HA的截短表达蛋白,获得纯化蛋白,并分析HA蛋白的反应原性。人工合成A/California/04/2009 H1N1流感病毒HA基因,以其为模板,PCR扩增HA的一部分基因,去除HA蛋白信号肽、跨膜区、胞内区的基因序列,仅扩增HA1和HA2的基因。将扩增的基因构建到pET 28(a)质粒上,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达HA蛋白,并经过Ni-NTA His Bind柱对其进行纯化,SDS-PAGE电泳鉴定HA蛋白的表达,Western blot鉴定HA蛋白的反应原性。通过原核表达获得了HA的截短表达蛋白,并制备了较高纯度的蛋白,Western blot显示HA蛋白具有很好的反应原性,为建立甲型H1N1流感病毒检测技术奠定了基础。
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