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建立了一种用高效液相色谱（HPLC）测定扁桃酸光学纯度的新方法。用苯胺将扁桃酸衍生化，产生相应的对映体衍生物，正己烷为流动相，乙醇和异丙醇作极性调节，用DNB—Leucine色谱柱进行分离。考察了流动相组成和柱温对其分离的影响，确定分析条件为：流动相为y（正己烷）：V（乙醇）：85：15，温度20℃，流速1．5mL／min。在此条件下拆分扁桃酸衍生物对映体，达到基线分离，分析时间在7min以内，分离因子达到1．62。与旋光仪方法的测定结果一致，两种方法测定的光学纯度偏差不超过1．96％。该方法可以准确、方