目的:建立林蛙皮胶原蛋白低温提取及纯化方法,保证胶原蛋白的活性,并对其生物学特性进行初步探讨。方法:采用低温酸酶提取结合的方法提取林蛙皮中的胶原蛋白,并对提取过程中过氧化氢的加入量进行考察;对纯化的胶原蛋白进行含量、相对分子质量分布等定性及定量检测,同时观察其对间充质干细胞增殖情况的影响。结果:在4℃经脱色脱脂处理(过氧化氢浓度为0.025%)后,用0.5 mol/L的醋酸提取48 h,沉淀再分别用0.67%、1.34%、2%的胃蛋白酶提取,在此工艺条件下,酸溶性胶原蛋白(ASC)的提取率为8.77%±0.44%,纯度为75.83%±3.78%;酶溶性胶原蛋白(PSC)的提取率为30.69%±0.83%,纯度为66.39%±1.79%。紫外扫描图谱表明提取物具有胶原蛋白的特征吸收。SDS-PAGE分析表明所得ASC与PSC均由2条α1链与1条α2链组成,为保持了三股螺旋结构特征的Ⅰ型胶原蛋白。对细胞生长影响的实验表明,ASC与PSC在0.05~20 mg/m L浓度范围对间充质干细胞的生长无抑制作用,并且在某些浓度下具有促进干细胞增殖的作用。结论:低温酸酶法可高效提取林蛙皮粉中的胶原蛋白,提取的胶原蛋白具有良好的生物学活性,本方法及提取的胶原蛋白在组织工程等领域具有良好的应用前景。