【摘 要】
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目的探讨烧伤患者血清(以下称烧伤血清)、痂下水肿液诱导人脐静脉血管内皮细胞株ECV304凋亡的分子机制. 方法将体外培养的ECV304随机分为:A组,用含体积分数30%正常人血清的培养基培养;B、C组,分别用含烧伤血清、痂下水肿液(体积分数同A组)的培养基培养.6、12、24、36 h后采用Hochest 33258荧光染色观察3组细胞核形态学改变,并计算细胞凋亡百分率.培养12 h后采用半胱氨酸
【机 构】
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目的探讨烧伤患者血清(以下称烧伤血清)、痂下水肿液诱导人脐静脉血管内皮细胞株ECV304凋亡的分子机制. 方法将体外培养的ECV304随机分为:A组,用含体积分数30%正常人血清的培养基培养;B、C组,分别用含烧伤血清、痂下水肿液(体积分数同A组)的培养基培养.6、12、24、36 h后采用Hochest 33258荧光染色观察3组细胞核形态学改变,并计算细胞凋亡百分率.培养12 h后采用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)检测试剂盒测定caspase-3、8、9的活化情况.培养12、24 h后进行琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡的特征性DNA梯状条带. 结果 A组各时相点下可见胞核呈弥散均匀荧光,B、C组细胞培养24 h后胞核呈现深染、致密的颗粒块状荧光.培养12～36 h B、C组的凋亡百分率均高于A组(P<0.01),其中36 h时B、C组的凋亡百分率分别为(38.9±7.3)%、(49.5±6.5)%,明显高于A组(2.2±0.3)%(P<0.01).B、C组培养12 h后caspase-3、8、9活性均高于A组(P<0.01).B、C组DNA琼脂糖电泳出现明显梯状条带,A组未见此现象. 结论烧伤血清、痂下水肿液通过同时激活死亡受体信号通路和线粒体信号通路导致ECV304细胞凋亡.
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