【摘 要】
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目的本研究旨在从分子水平证明碳酸酐酶Ⅳ型(CAⅣ)在兔角膜内皮细胞中的表达.方法采用逆转录多聚酶连反应(RT-PCR),应用CAⅣ的特异性引物,从新鲜的和培养的兔角膜内皮细胞的
【机 构】
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山东省潍坊市潍坊医学院,潍坊市第二人民医院
【基金项目】
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the Chinese Medical Science Foundation of Shandong;
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目的本研究旨在从分子水平证明碳酸酐酶Ⅳ型(CAⅣ)在兔角膜内皮细胞中的表达.方法采用逆转录多聚酶连反应(RT-PCR),应用CAⅣ的特异性引物,从新鲜的和培养的兔角膜内皮细胞的总RNA中扩增CAⅣ,并对RT-PCR产物进行亚克隆和序列分析.应用大鼠抗CAⅣ的多克隆抗体,采用免疫杂交和间接免疫荧光技术,从新鲜的和培养的兔角膜内皮细胞中检测CAⅣ蛋白的表达和分布.结果新鲜的和培养的兔角膜内皮细胞中,RT-PCR分析都得到了预期长度的CAⅣ阳性条带.序列分析进一步证实了CAⅣ的表达.免疫杂交在大约52KD得到了单一条带.在培养的角膜内皮细胞中,间接免疫荧光染色显示有明显的阳性着染.结论碳酸酐酶Ⅳ在兔角膜内皮细胞中表达.它可能促进经内皮细胞的碳酸氢根离子的运输,从而维持角膜的水合状态和透明性.
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