FasL逆转录病毒转移体系的建立及其在肝癌细胞中的表达

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目的 研究Fas/FasL系统的生物学功能,探讨转FasL基因治疗肿瘤的可行性。方法[ HT5”SS〗将大鼠FasL全长cDNA亚克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,获得FasL正向单拷贝插入子pLXSN/FasL+,经PA317包装细胞包装,获得G418抗性克隆,命名为PA317/pLXSN-FasL +细胞。结果 聚合酶链反应扩增证实PA317/pLXSN-FasL + 细胞有外源性FasL基因整合;检测病毒滴度为4.7×107/L;病毒上清转染肝癌细胞株 HepG-2、SMMC-7721 、CBRH-7919 和 RH-35后,流式细胞仪检测肝癌细胞表面FasL分子表达的阳性率分别为97 .3%、99.1%、99.4%和72.3%,并证实Fas高表达细胞株HepG-2及CBRH-7919对FasL诱导的凋亡十分敏感。结论 将FasL基因导入逆转录病毒载体是一种行之有效的基因转移途径,可用来诱导Fas高表达细胞凋亡,为转FasL基因治疗肿瘤提供了依据。

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