肿瘤-睾丸抗原LAGE-1基因的原核表达纯化和抗血清制备

来源 :中华肿瘤防治杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shuxiaopei110
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目的:构建人肿瘤-睾丸抗原LAGE-1的原核表达质粒,表达、纯化LAGE-1融合蛋白并制备GST-LAGE-1多克隆抗体。方法:逆转录聚合酶链反应(RrPCR)方法扩增人肝癌组织LAGE-1基因3’端片段,连入原核表达载体pGEX-4T-1(+),构建原核表达质粒pGEX-LAGE-1并测序。将该质粒转化大肠埃希菌BI-21(DE3)进行诱导表达,经包涵体透析复性和谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统分离纯化目的蛋白。用纯化的融合蛋白GST-LAGE-1免疫新西兰大白兔,间接ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀
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