【摘 要】
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对5株临床分离的耐氟喹诺酮类药物的金黄色葡萄球菌(MIC值范围:4～≥128mg/L),提取各细菌染色体DNA,对gyrA和grlA基因进行PCR扩增,产物与pMD18-T载体连接,转化至大肠杆菌JM109
【机 构】
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解放军军需大学动物科技系,吉林,长春,130062吉林省牧业管理局,吉林,长春,130021;
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对5株临床分离的耐氟喹诺酮类药物的金黄色葡萄球菌(MIC值范围:4～≥128mg/L),提取各细菌染色体DNA,对gyrA和grlA基因进行PCR扩增,产物与pMD18-T载体连接,转化至大肠杆菌JM109感受态细胞.筛选阳性克隆,测序.序列分析结果表明,5株菌均发生了基因突变.突变位点grlA:Ser80(TCC)→Phe(TGC),Ser80(TCC)→Tyr(TAC);gyrA:Ser84(TCA)→Leu(TTA)、Ser84(TCA)→Ala(GCA)、Glu88(GAA)→Lys(AAA),其中2株对氟喹诺酮类药物的MIC值低(4～64mg/L),均发生grlA单一点突变,其余3株在gyrA和grlA上产生多突变位点,且对氟喹诺酮类药物的MIC值较高(8～≥128mg/L).说明单一的点突变只能引起低水平或中等水平的耐药,高水平的耐药需要多位点的突变.5株耐药菌株均发生grlA Ser80→Tyr(Phe)点突变,提示环丙沙星、诺氟沙星等氟喹诺酮类药物作用于金黄色葡萄球菌的首要靶酶是拓扑异构酶IV.
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