【摘 要】
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目的:构建甲型H3N2流感病毒非结构蛋白-1( nonstructal-1,NS1)真核表达载体并表达其编码蛋白；探讨NS1对细胞增殖的影响.方法:从江苏省甲型H3N2流感病毒毒株提取病毒RNA,采用RT
【机 构】
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江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所,卫生部肠道病原微生物重点实验室,江苏南京210009;南京医科大学江苏省现代病原生物学重点实验室,江苏南京210029
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目的:构建甲型H3N2流感病毒非结构蛋白-1( nonstructal-1,NS1)真核表达载体并表达其编码蛋白；探讨NS1对细胞增殖的影响.方法:从江苏省甲型H3N2流感病毒毒株提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD 18-T/NS1质粒,双酶切pMD18-T/NS1与pXJ40-HA后,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过免疫印迹法鉴定NS1蛋白的表达.3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-yl)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测NS1转染细胞后对细胞增殖的影响.结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功；免疫印迹法证实NS1蛋白的表达.MTT法证实转染NS1质粒后对细胞增殖有抑制作用.结论:成功克隆了NS1全长基因,构建了其真核表达载体,并初步验证了NS1蛋白过表达后能抑制细胞的增殖,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1的细胞模型和NS1蛋白对细胞增殖和凋亡作用机制的进一步研究提供了基础.
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