新疆贝母DNA提取及ISSR-PCR体系的建立与优化

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目的:从新疆贝母干叶片中提取高质量的DNA,建立ISSR—PCR体系并进行优化。方法:通过改进的CTAB法提取基因组DNA;综合利用单因素实验和L9(3^4)正交实验2种方法,对镁离子、dNTP、模板DNA含量、TaqDNA聚合酶量、引物浓度等因素进行优化,并采用温度梯度筛选引物的退火温度。结果:新疆贝母20/xLISSR—PCR最适反应体系dNTP为0.3mm01/L,Mg^2+为2.0mm01/L,模板浓度为40~100ng/(20μL),引物为1.2mmol/L,TaqDNA聚合酶为1.013/20
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