导向溶栓分子scFv-UK32中连接肽的引入和在昆虫细胞中的表达

来源 :北京大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：Cecil1119

【摘要】

：

为了提高重组导向溶栓分子scFv-UK32的溶纤活性,通过重组PCR方法在编码scFv与UK32的碱基之间引入编码KLGGGG连接肽的碱基序列,并克隆到转移载体pBacPAK9上,通过与线性病毒DNA

【作者】

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鞠武建胡美浩

【机构】

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北京大学生命科学学院,

【出处】

：

北京大学学报

【发表日期】

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2004年期

【关键词】

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导向溶栓连接肽昆虫细胞表达

【基金项目】

：

国家高技术研究发展计划(863计划);

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为了提高重组导向溶栓分子scFv-UK32的溶纤活性,通过重组PCR方法在编码scFv与UK32的碱基之间引入编码KLGGGG连接肽的碱基序列,并克隆到转移载体pBacPAK9上,通过与线性病毒DNA BacPAK6/Bsu36I digest共转染到昆虫细胞Sf 9内,进行表达.表达产物分泌到上清中,共转染后第5d(天)用纤维平板法测得Sf 9细胞上清溶纤活性达到107 IU/mL,比未引入连接肽的scFv-UK32的表达活性(25 IU/mL)高.ELISA实验表明共转染上清具有明显对活化血小板特异结合能力.Western Blotting实验表明共转染上清可与Pro-UK的单抗特异结合.

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