细胞松弛素B(CB)对水牛卵母细胞玻璃化冷冻保存的影响

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研究主要探讨冷冻前细胞松弛素B(CB)预处理水牛MⅡ期卵母细胞对其冷冻效果的影响。以水牛MⅡ期的卵母细胞为材料,通过玻璃毛细管(GMP)和玻璃化冷冻液EDS33(16.5%EG+16.5%DMSO+Sucrose)对水牛MⅡ期的卵母细胞进行两步法玻璃化冷冻保存,即卵母细胞首先放入预平衡液(7.5%EG+7.5%DMSO+Sucrose)中平衡3 min,然后再移入玻璃化冷冻液中30 s后装管直接投入液氮。冷冻前卵母细胞随机分为2组,一组用7.5μg/mL CB预处理30 min,另一组未用CB预处理作对照组,然后都冷冻保存。解冻是在蔗糖浓度逐渐降低的解冻液中进行的。解冻后存活的卵母细胞进行孤雌激活,以分裂率和囊胚发育率作为评定卵母细胞冷冻效果的指标。结果发现,GMP组和GMP+CB组卵母细胞解冻后的存活率(88.89%、94.20%)和培养后发育到囊胚的比率(8.82%、14.55%)差异均不显著(P>0.05),但GMP组和GMP+CB组存活卵母细胞激活后的分裂率差异显著(32.69%、55.56%,P<0.05),所以细胞松弛素B预处理可以提高GMP冷冻卵母细胞的发育能力。
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