目的 观察5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌细胞(SW480)株增殖凋亡的影响并探讨其机制.方法 以2.5、5.0、10.0μmol/L的5-Aza-CdR作用于SW480细胞72 h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率；甲基化测序聚合酶链反应(BSP)检测Disable-2 (DAB2)胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)岛的甲基化状态；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测DAB2mRNA的表达；激光共聚焦显微镜检测DAB2蛋白的表达.结果 (1)5-Aza-CdR对SW480细胞生长有抑制作用,用药处理后细胞凋亡率分别为(12.89±0.59)％、(16.74±1.80)％、(33.02±3.30)％,(P＜0.01)；(2) 5-Aza-CdR处理前甲基化程度为89.09％,处理后依次为70.00％、55.45％、10.91％,启动子甲基化水平明显降低(P＜0.01)；(3)5-Aza-CdR处理前RT-PCR可以少量扩增出DAB2 mRNA特异性条带(平均灰度比值为0.266±0.013),5-Aza-CdR处理后可见DAB2 mRNA转录水平增加,且mRNA水平与药物的浓度呈正相关,平均灰度比值2.5 μmol/L组为0.363±0.009,5.0 μmol/L组为0.490±0.021；10.0 μmol/L组为0.753±0.028(P＜0.01)；(4) 5-Aza-CdR处理前有少量DAB2蛋白表达于细胞质及细胞核中(荧光强度为:94.50±13.39),予以5-Aza-CdR处理之后DAB2的表达量增加(荧光强度为:123.75±15.19,P＜0.01).结论 5-Aza-CdR能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza-CdR能逆转SW480细胞DAB2启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达。
5-杂氮-2\'-脱氧胞苷对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及机制
【摘 要】
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目的 观察5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌细胞(SW480)株增殖凋亡的影响并探讨其机制.方法 以2.5、5.0、10.0μmol/L的5-Aza-CdR作用于SW480细胞72 h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率；甲基化测序聚合酶链反应(BSP)检测Disable-2 (DAB2)胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)岛的甲基化状态；逆转录-聚合酶链式反应(RT-P
【机 构】
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400010重庆医科大学附属第二医院胃肠外科,400010重庆医科大学附属第二医院胃肠外科,400010重庆医科大学附属第二医院胃肠外科,400010重庆医科大学附属第二医院胃肠外科,400010重庆
【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2013年30期
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