丹参酮ⅡA对人胎盘间充质干细胞向心肌细胞分化的诱导作用及其机制

来源 :吉林大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:paul5260
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目的:探讨丹参酮ⅡA (TanⅡA)对人胎盘间充质干细胞(hPDMSCs)向心肌细胞分化的诱导作用及其机制,为TanⅡA作为心肌细胞分化诱导剂提供实验依据。方法:采用不同浓度TanⅡA (0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0和10.0 mg·L-1)处理hPDMSCs,MTT法筛选出无毒剂量的TanⅡA (0.1mg·L-1)用于实验。hPDMSCs培养体系分为对照组、5-氮胞苷(5-aza,10μmol·L-1)诱导组和TanⅡA (0.1mg·L-1)诱导组。培养20d后,免疫组织化学法检测各组细胞中α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)的表达;免疫荧光法检测各组细胞中心肌肌钙蛋白I (cTnI)的阳性表达率,计算心肌细胞分化率;Westernblotting法检测各组细胞中心肌转录调节因子4 (GATA4)、心钠素(ANF)、cTnI、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白表达水平。结果:hPDMSCs的生物学特性符合间充质干细胞。MTT法,当TanⅡA浓度大于0.1mg·L-1时,细胞存活率随浓度的增加而降低。对照组细胞在培养12d以前呈快速增长趋势,培养12d后细胞增殖活性降低;与对照组比较,5-aza诱导组和TanⅡA诱导组细胞增殖活性明显降低(P<0.05)。免疫组织化学染色,对照组细胞不表达α-SCA,5-aza诱导组和TanⅡA诱导组细胞均表达α-SCA,且TanⅡA诱导组更明显。与对照组比较,5-aza诱导组和TanⅡA诱导组细胞中GATA4 (t5-aza=2.937,P5-aza<0.05;tTanⅡA=4.769,PTanⅡA<0.05)、ANF (t5-aza=3.728,P5-aza<0.05;tTanⅡA=5.912,PTanⅡA<0.05)、cTnI (t5-aza=3.623,P5-aza<0.05;tTanⅡA=7.153,PTanⅡA<0.05)和GSK-3β(t5-aza=2.995,P5-aza<0.05;tTanⅡA=5.420,PTanⅡA<0.05)蛋白表达水平明显升高,β-catenin(t5-aza=2.985,P5-aza<0.05;tTanⅡA=6.951,PTanⅡA<0.05)蛋白表达水平明显降低;与5-aza诱导组比较,TanⅡA诱导组GATA4、ANF和GSK-3β蛋白表达水平进一步升高(P<0.05)。结论:TanⅡA能诱导hPDMSCs分化为心肌细胞,且效果优于5-aza,其机制可能与TanⅡA能抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。
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