【摘 要】
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目的 构建表达白细胞介素(IL)-18的条件增殖腺病毒.方法 以质粒pJW-IL18为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增获得全长IL-18基因并改变其包含的酶切位点Bgl Ⅱ.将IL-18克隆至pCA13质
【机 构】
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徐州医学院附属医院泌尿外科,徐州医学院肿瘤防治重点实验室
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目的 构建表达白细胞介素(IL)-18的条件增殖腺病毒.方法 以质粒pJW-IL18为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增获得全长IL-18基因并改变其包含的酶切位点Bgl Ⅱ.将IL-18克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13-IL18.用Bgl Ⅱ从pCA13-IL18酶切出包含CMV启动子的IL-18表达框,并克隆进条件增殖腺病毒质粒pZD55,构建重组质粒pZD55-IL18.将pZD55-IL18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞,9～12 d后出现病毒空斑.提取重组腺病毒的DNA,PCR鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD55-IL18.大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度.结果 成功构建了表达IL-18的条件增殖腺病毒.结论 成功构建的ZD55-IL18为肿瘤靶向治疗奠定基础.
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