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摘 要：本文采用高校液相测定了阿莫西林钠原料中阿莫西林钠的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-甲醇-水 （10：10：80）为流动相，检测波长为254nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。阿莫西林钠在0.1～3.2mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。阿莫西林钠的平均回收率为99.3%，RSD为0.96%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于阿莫西林钠原料中阿莫西林钠的含量测定。
关键词：阿莫西林钠原料；阿莫西林钠；含量
阿莫西林别名：阿摩西林、阿莫灵、阿莫仙、特力士、新达贝宁、酚塔西林、酚塔西林、奈他美、羟氨苄青霉素、三水羟氨苄等。阿莫西林钠化学名为（2S，5R，6R）-3，3-二甲基-6-[（R）-（-）-2-氨基-2-（4-羟基苯基）乙酰氨基]-7-氧代-4硫杂-1-氮杂双环（3.2.0）庚烷-2-甲酸钠。阿莫西林钠适应症为溶血链球菌、肺炎链球菌、葡萄球菌或流感嗜血杆菌所致中耳炎、鼻窦炎、扁桃体炎；溶血链球菌、肺炎链球菌、葡萄球菌或流感嗜血杆菌所致急性支气管炎、肺炎等下呼吸道感染；大肠埃希菌、奇异变形杆菌所致的泌尿生殖道感染；溶血链球菌、葡萄球菌或大肠埃希菌所致的皮肤软组织感染。本文采用高校液相测定了阿莫西林钠原料中阿莫西林钠的含量。
1 仪器与试药
EPED-E-EDI系列超纯水机（南京易普易达科技发展有限公司）；日立高效液相色谱仪Chromaster（天美（中国）科学仪器有限公司）；UV-2100双光束紫外/可见分光光度计（北京北分瑞利分析仪器（集团）公司）；RE-5220旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；赛多利斯BT25S分析天平（北京晨曦勇创科技有限公司）；Orion Star A便携式高端pH测量仪（赛默飞世尔科技水质分析仪器）；AP-01P型无油真空/压力泵（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；美国必能信超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）。阿莫西林钠对照品由中国药品生物制品检定所提供。十六烷基三甲基溴化铵（广州迪鑫多科学仪器有限公司）、氢氧化钾（广州迪鑫多科学仪器有限公司）、十二烷基硫酸钠（济南汇丰达化工有限公司）、磷酸（济南汇丰达化工有限公司）、冰醋酸（济南汇丰达化工有限公司）、乙腈（济南汇丰达化工有限公司）、甲醇（广州迪鑫多科学仪器有限公司）、三乙胺（广州迪鑫多科学仪器有限公司）、磷酸二氢铵（广州迪鑫多科学仪器有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-水（10：10：80）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按阿莫西林钠峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取阿莫西林钠原料，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取30分钟，放冷，过滤，滤液转移至50毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取阿莫西林钠对照品约5mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取阿莫西林钠合成用原料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在阿莫西林钠出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，阿莫西林钠对照品在0.1～3.2mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取阿莫西林钠对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.92%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批阿莫西林钠原料样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品阿莫西林钠峰面积积分值的RSD为0.89%。结果表明阿莫西林钠至少在4小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的阿莫西林钠对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.96%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定阿莫西林钠原料三批样品中阿莫西林钠的含量，含量为88.6%、89.1%、88.2%。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-水（10：10：80），0.067moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02），0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（pH值5.0）-乙腈（体积比97.5∶2.5），缓冲盐溶液（内含0.01mol.L-1十六烷基三甲基溴化铵和0.01mol.L-1磷酸二氢钾）（用氢氧化钾试液调节pH值为6.5）-乙腈（50∶50），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为5.0），0.1mol/L磷酸二氢钾-0.018mol/L十二烷基硫酸钠-甲醇-乙腈（275：275：200：250）（用磷酸调pH值至2.6），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），水-乙腈-三乙胺（80∶20：0.01）不同比例的流动相，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈（97.5∶2.5）结果以乙腈-甲醇-水（10：10：80）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水（10：10：80）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于阿莫西林钠原料中阿莫西林钠的含量测定。
参考文献
[1]杜丽坤，王桂媛.阿莫西林钠/舒巴坦钠与阿莫西林钠/克拉维酸钾治疗急性细菌性感染疗效评价[J].中国新药杂志，2006（17）.
[2]柯红梅，肖娟，曾晓黎，刘桂琴.HPLC法测定阿莫西林胶囊含量的不确定度分析[J].西北药学杂志，2009（5）.
[3]李彦威，勾洪磊，杨秀花，王志忠.反相高效液相色谱法测定阿莫西林[J].理化检验（化学分册），2008（3）.
[4]刘浩，杨美成，仇仕林.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].中国抗生素杂志，2006（1）.
[5]戚燕，杨庆云，童元峰，郝玲花，吴松.HPLC法同时测定复方阿莫西林氯唑西林钠胶囊的含量及有关物质[J].中国药师，2009（9）.
关键词：阿莫西林钠原料；阿莫西林钠；含量
阿莫西林别名：阿摩西林、阿莫灵、阿莫仙、特力士、新达贝宁、酚塔西林、酚塔西林、奈他美、羟氨苄青霉素、三水羟氨苄等。阿莫西林钠化学名为（2S，5R，6R）-3，3-二甲基-6-[（R）-（-）-2-氨基-2-（4-羟基苯基）乙酰氨基]-7-氧代-4硫杂-1-氮杂双环（3.2.0）庚烷-2-甲酸钠。阿莫西林钠适应症为溶血链球菌、肺炎链球菌、葡萄球菌或流感嗜血杆菌所致中耳炎、鼻窦炎、扁桃体炎；溶血链球菌、肺炎链球菌、葡萄球菌或流感嗜血杆菌所致急性支气管炎、肺炎等下呼吸道感染；大肠埃希菌、奇异变形杆菌所致的泌尿生殖道感染；溶血链球菌、葡萄球菌或大肠埃希菌所致的皮肤软组织感染。本文采用高校液相测定了阿莫西林钠原料中阿莫西林钠的含量。
1 仪器与试药
EPED-E-EDI系列超纯水机（南京易普易达科技发展有限公司）；日立高效液相色谱仪Chromaster（天美（中国）科学仪器有限公司）；UV-2100双光束紫外/可见分光光度计（北京北分瑞利分析仪器（集团）公司）；RE-5220旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；赛多利斯BT25S分析天平（北京晨曦勇创科技有限公司）；Orion Star A便携式高端pH测量仪（赛默飞世尔科技水质分析仪器）；AP-01P型无油真空/压力泵（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；美国必能信超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）。阿莫西林钠对照品由中国药品生物制品检定所提供。十六烷基三甲基溴化铵（广州迪鑫多科学仪器有限公司）、氢氧化钾（广州迪鑫多科学仪器有限公司）、十二烷基硫酸钠（济南汇丰达化工有限公司）、磷酸（济南汇丰达化工有限公司）、冰醋酸（济南汇丰达化工有限公司）、乙腈（济南汇丰达化工有限公司）、甲醇（广州迪鑫多科学仪器有限公司）、三乙胺（广州迪鑫多科学仪器有限公司）、磷酸二氢铵（广州迪鑫多科学仪器有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-水（10：10：80）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按阿莫西林钠峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取阿莫西林钠原料，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取30分钟，放冷，过滤，滤液转移至50毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取阿莫西林钠对照品约5mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取阿莫西林钠合成用原料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在阿莫西林钠出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，阿莫西林钠对照品在0.1～3.2mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取阿莫西林钠对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.92%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批阿莫西林钠原料样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品阿莫西林钠峰面积积分值的RSD为0.89%。结果表明阿莫西林钠至少在4小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的阿莫西林钠对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.96%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定阿莫西林钠原料三批样品中阿莫西林钠的含量，含量为88.6%、89.1%、88.2%。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-水（10：10：80），0.067moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02），0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（pH值5.0）-乙腈（体积比97.5∶2.5），缓冲盐溶液（内含0.01mol.L-1十六烷基三甲基溴化铵和0.01mol.L-1磷酸二氢钾）（用氢氧化钾试液调节pH值为6.5）-乙腈（50∶50），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为5.0），0.1mol/L磷酸二氢钾-0.018mol/L十二烷基硫酸钠-甲醇-乙腈（275：275：200：250）（用磷酸调pH值至2.6），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），水-乙腈-三乙胺（80∶20：0.01）不同比例的流动相，0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈（97.5∶2.5）结果以乙腈-甲醇-水（10：10：80）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水（10：10：80）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于阿莫西林钠原料中阿莫西林钠的含量测定。
参考文献
[1]杜丽坤，王桂媛.阿莫西林钠/舒巴坦钠与阿莫西林钠/克拉维酸钾治疗急性细菌性感染疗效评价[J].中国新药杂志，2006（17）.
[2]柯红梅，肖娟，曾晓黎，刘桂琴.HPLC法测定阿莫西林胶囊含量的不确定度分析[J].西北药学杂志，2009（5）.
[3]李彦威，勾洪磊，杨秀花，王志忠.反相高效液相色谱法测定阿莫西林[J].理化检验（化学分册），2008（3）.
[4]刘浩，杨美成，仇仕林.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].中国抗生素杂志，2006（1）.
[5]戚燕，杨庆云，童元峰，郝玲花，吴松.HPLC法同时测定复方阿莫西林氯唑西林钠胶囊的含量及有关物质[J].中国药师，2009（9）.