【摘 要】
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以真核质粒pcDNA3.1-flag-nsp1α为模板,利用PCR扩增出nsp1α基因片段,构建原核重组载体pET32a-nsp1α,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态,1 mmol/L IPTG在37℃诱导表达6 h,成功
【机 构】
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河南农业大学生命科学学院; 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室; 河南师范大学生命科学学院; 西北农林科技大学动物医学院;
【基金项目】
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河南省自然科学基金项目(182300410077);农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室开放课题(PKLAI20170605);河南省高等学校重点科研项目(17A180006);河南师范大学优秀青年科学基金项目(校20170031);2018年河南师范大学大学生创新创业训练项目(84)
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以真核质粒pcDNA3.1-flag-nsp1α为模板,利用PCR扩增出nsp1α基因片段,构建原核重组载体pET32a-nsp1α,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态,1 mmol/L IPTG在37℃诱导表达6 h,成功获得以包涵体形式存在的重组蛋白,能够与小鼠抗His标签单克隆抗体反应;包涵体复性后作为抗原免疫新西兰大白兔,3次免疫后20 d获得兔多抗血清。通过间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光、免疫组化等试验获得了高效价的兔多抗血清,该血清能够特异性地识别真核质粒表达的nsp1α以及PRRSV BJ4株。该试验成功表达了pET32a-nsp1α重组蛋白,并制备了高效价、高特异性的兔抗nsp1α多克隆抗体。
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