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目的:探讨信号素3A( SEMA3A)在大鼠氧诱导视网膜病变( OIR)模型中的表达变化及其对视网膜组织损伤的影响。方法实验研究。采用随机数字表法将新生大鼠48只分为4组,每组12只(12眼)。正常对照组于正常空气环境下饲养,余3个组隔天交替吸入氧含量为50%和10%的氮氧混合气体,制备OIR模型。 OIR+SEMA3A抑制组于出生后7 d给予单眼玻璃体腔注射兔抗大鼠SEMA3A多克隆抗体(40 mg/L,2μl);OIR+IgG组出生后7 d给予单眼玻璃体腔注射等量兔IgG (40 mg/L,2μl);OIR组不进行玻璃体腔注射。各组大鼠出生后18 d取材,HE染色检测视网膜厚度、神经节细胞层( RGCL)细胞数和突破内界膜内皮细胞数,TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡并计算凋亡指数( AI);免疫印迹法检测视网膜SEMA3A和Caspase-3蛋白p17亚基表达;免疫荧光染色定位检测SEMA3A表达。各组大鼠视网膜厚度、RGCL细胞数、突破内界膜内皮细胞数,视网膜AI,SEMA3A和Caspase-3蛋白p17亚基相对表达量的比较采用单因素方差分析,进一步的两两比较采用LSD-t检验。结果 HE染色结果显示,正常对照组视网膜厚度为(117.07±8.13)μm,OIR组为(70.93±5.68)μm,OIR+SEMA3A抑制组为(91.28±4.58)μm,OIR+IgG组为(67.27±10.15)μm,差异有统计学意义(F=13.222,P=0.002)。正常对照组RGCL细胞数为42.7±3.6,OIR组为24.3±3.1, OIR+SEMA3A抑制组为35.0±6.2,OIR+IgG组为22.8±4.3,差异有统计学意义( F=22.537,P=0.000)。正常对照组突破内界膜的内皮细胞数为1.0±0.3,OIR组为14.2±3.2,OIR+SEMA3Aab组为9.6±1.1, OIR +IgG 组为10.8±1.6,差异有统计学意义( F =14.478, P =0.002)。 OIR +SEMA3A抑制组视网膜厚度、RGCL细胞数均低于正常对照组(P<0.01),但均较OIR组和OIR+IgG组明显增高(P<0.01);OIR+SEMA3A抑制组突破内界膜的内皮细胞数高于正常对照组(P<0.01),但与OIR组和OIR+IgG组差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组视网膜AI值为27.67±2.51, OIR组为58.33±8.50,OIR+SEMA3A抑制组为37.33±5.03,OIR+IgG组为61.67±6.65,差异有统计学意义(F=19.250,P=0.001)。 OIR+SEMA3A抑制组视网膜AI较OIR+IgG组和OIR组降低(P<0.01)。应用TatolLab 2.01软件对免疫印迹法检出的蛋白条带进行分析,正常对照组SEMA3A相对表达量为0.64±0.03,OIR组为0.97±0.05,OIR+SEMA3A抑制组为0.41±0.02,OIR+IgG组为1.03±0.15,差异有统计学意义(F=38.59,P=0.000)。 OIR组视网膜组织SEMA3A蛋白相对表达量较正常对照组明显增高( P<0.01);OIR+SEMA3Aab组视网膜组织SEMA3A蛋白相对表达量明显低于OIR组和OIR+IgG组(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,正常对照组SEMA3A主要分布于光感受器细胞层, OIR 组和 OIR +IgG 组 SEMA3A 荧光强度明显增加,各层均可见着染, OIR +SEMA3A抑制组其荧光强度明显减弱。免疫印迹法检测各组视网膜组织Caspase-3蛋白p17亚基相对表达量,正常对照组为0.00±0.00,OIR组为0.30±0.02,OIR+SEMA3A抑制组为0.12±0.01, OIR+IgG组为0.27±0.02,差异有统计学意义( F=304.619,P<0.01)。其中OIR+SEMA3A抑制组较OIR+IgG组和OIR组明显降低(P<0.01)。结论大鼠OIR模型视网膜组织中SEMA3A表达上调可能促进视网膜神经细胞凋亡。阻断SEMA3A可减轻视网膜组织的凋亡程度。(中华眼科杂志,2014,50:440-447)