【摘 要】
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目的通过改变多种实验条件提高CaV 1.2钙通道C末端GST融合蛋白(GST-CT1)在大肠杆菌BL21中的表达量及分离纯化产量。方法把pGEX-6p-3/CT1质粒转入大肠杆菌BL21中,筛选其中转化
【机 构】
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中国医科大学药学院药物毒理学教研室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31471091,21677030)
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目的通过改变多种实验条件提高CaV 1.2钙通道C末端GST融合蛋白(GST-CT1)在大肠杆菌BL21中的表达量及分离纯化产量。方法把pGEX-6p-3/CT1质粒转入大肠杆菌BL21中,筛选其中转化成功的菌株培养并用异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)在不同细菌浓度,不同诱导时间或不同温度下诱导表达GST-CT1蛋白,Glutathione-Sepharose 4B beads(GS-4B beads)纯化蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白表达水平。结果当吸光度为0.6～1.0时,GST-CT1在大肠杆菌BL21中的表达量较高,IPTG诱导表达蛋白大于4h后无明显表达量差异,并且当诱导温度为25℃时,蛋白的产量将大大增加。结论可以通过控制细菌数量、控制诱导时长和降低诱导温度的方法来提高GST-CT1蛋白的产量。
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