【摘 要】
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采用RT-PCR技术从猪脾淋巴细胞总RNA中扩增出猪干扰素γcDNA(SwIFN-γ2)。SwIFN-γ2与已报道的猪干扰素γ序列基本一致,仅在462位核苷酸处发生了点变异。在SwIFN-γ2成熟蛋白
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采用RT-PCR技术从猪脾淋巴细胞总RNA中扩增出猪干扰素γcDNA(SwIFN-γ2)。SwIFN-γ2与已报道的猪干扰素γ序列基本一致,仅在462位核苷酸处发生了点变异。在SwIFN-γ2成熟蛋白基因两端分别合成含SphⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到pQE30表达载体,转化宿主菌SG13009(pREP4),经IPTG诱导表达了N’端含6个组氨酸的重组猪干扰素γ(6His-rSwIFNγ2)。重组干扰素的表达量占总菌体蛋白的33.5%。采用Ni-NTA金属螯合亲和层析纯化6His-rSwIFNγ2,其纯度达90%以上,经8mol/L尿素溶液变性、透析复性后,其抗滤泡性口炎病毒比活性为8×103~1.6×104 U/mg。
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