定量PCR法监测白血病细胞微小残留病

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目的:建立实时定量监测白血病细胞WT1基因表达的方法。方法:设计并合成WT1基因的全长引物,筛选引物和定量引物,构建HL60细胞的cDNA文库,从中调取并纯化WT1全长基因,通过HindIII与EcoRI的Y,K酶切,连接构建到克隆载体pUC19中,通过菌落PCR,测序鉴定出阳性克隆pUC19-WT1。按有限稀释法制备标准品质粒pUC19-WT1,绘制WT1基因的扩增曲线,熔解曲线和标准曲线,建立全反式维甲酸诱导HL60细胞分化的模型,实时定量PCR法监测在ATRA处理HL60细胞后WT1基因的表达水平。
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