【摘 要】
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目的:构建人单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的慢病毒载体质粒,并建立其慢病毒表达系统。方法:利用酶切分别获取目的基因TK片段及慢病毒pLenti6/V5载体片段,将目的基因插入
【机 构】
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南方医科大学珠江医院神经外科; 广州军区广州总医院神经外科; 北京本元正阳基因技术有限公司; 北京本元正阳基因技术有限公司 广州510282广州军区广州总医院神经外科;
【基金项目】
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广东省自然科学基金(001122);全军医学科研“十五”计划项目(01MA038)
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目的:构建人单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的慢病毒载体质粒,并建立其慢病毒表达系统。方法:利用酶切分别获取目的基因TK片段及慢病毒pLenti6/V5载体片段,将目的基因插入载体相应酶切位点,构建pLenti6/V5-TK质粒。构建的重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定。利用慢病毒表达系统(ViraPowerTMLentiviral Ex-pression Systems),将重组质粒与包装系统质粒(pLP1,pLP2,pLP/VSVG)4质粒共转染293T细胞,48h后收集培养上清并感染大鼠胶质瘤细胞9L,抗稻瘟菌素(blasticidin,BSD)筛选9L/TK细胞。MTT方法测试更昔洛韦(ganci-clovir GCV)对体外培养的9L/TK细胞杀伤效果。结果与结论:构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(transducing units,TU)/ml。经BDS筛选的9L/TK细胞对GCV杀伤敏感。成功构建了TK基因慢病毒载体质粒pLenti6/V5-TK,并建立了其慢病毒表达系统。
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