【摘 要】
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目的 用功能化氧化硅泡沫负载甲基化CpG结合域(methyl-CpG binding domain,MBD)建立一种用于大样本初筛时富集甲基化DNA的方法.方法 将具有超大介孔尺寸的氧化硅泡沫(mesocel
【机 构】
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复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室,复旦大学上海医学院化学系
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目的 用功能化氧化硅泡沫负载甲基化CpG结合域(methyl-CpG binding domain,MBD)建立一种用于大样本初筛时富集甲基化DNA的方法.方法 将具有超大介孔尺寸的氧化硅泡沫(mesocellular silica foam,MCF)功能化并负载融合蛋白GST-MBD以结合甲基化DNA.结果 MCF功能化后仍保持较大的笼状孔结构,孔径约为55 nm,窗口约30 nm,空隙容积高达1.0 m3/g,MBD蛋白负载量达53 wt％.具有较高的结合甲基化DNA的活性和稳定性.在缓冲液盐浓度为500～550 mmol/L时,MCF-MBD能较为专一地区分并富集混合溶液中的甲基化DNA.结论 该方法为高通量和自动化检测DNA甲基化提供了一个较好的选择和分子生物学依据,为临床应用和DNA甲基化相关疾病的研究奠定了基础.
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